基于FRET技术MMP3生物传感器载体的构建和鉴定-中国学术期刊网络出版总库

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基于FRET技术MMP3生物传感器载体的构建和鉴定

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【英文篇名】	Construction and identification of FRET-based MMP3 biosensor
【下载频次】	★★★☆
【作者】	饶烽; 崔钢华; 王琰; 刘伟; 曹薇薇; 史晨辉; 王维山;
【英文作者】	RAO Feng; CUI Ganghua; WANG Yan; LIU Wei; CAO Weiwei; SHI Chenhui; WANG Weishan; Department of Orthopedics; First Affiliated Hospital; School of Medicine; Shihezi University; Key Laboratory of Xinjiang Endemic Diseases; Ministry of Education;
【作者单位】	石河子大学医学院第一附属医院骨科; 新疆民族与地方病教育部重点实验室;
【文献出处】	吉林大学学报(医学版) , Journal of Jilin University(Medicine Edition), 编辑部邮箱 2016年 02期期刊荣誉：中文核心期刊要目总览 ASPT来源刊 CJFD收录刊
【中文关键词】	荧光共振能量转移; 基质金属蛋白酶3; 生物传感器;
【英文关键词】	flurorescence resonance energy transfer; matrix metalloproteinase 3; biosensor;
【摘要】	目的:探讨基质金属蛋白酶3(MMP3)生物传感器载体的构建,阐明MMP3在活细胞中表达的时空信息。方法:构建定位于细胞膜表面的ECFP-MMP3-YPet生物传感器载体并进行鉴定;转染293T细胞24h后观察转染效率;加尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)刺激293T细胞,运用荧光共振能量转移(FRET)技术在共聚焦显微镜下观察MMP3生物传感器载体的荧光共振能量转移情况ECFP-MMP3-YPet biosensor。结果:成功构建ECFP-MMP3-YPet biosensor;PCR和双酶切鉴定,MMP3-YPet约780bp,转染293T细胞后MMP3生物传感器在胞质较均匀分布,转染效率约40%。uPA刺激293T细胞后,胞质和胞核内FRET比值逐渐降低,约30min时达到最小值,随后恢复正常。结论:基于FRET构建的MMP3生物传感器可以敏感而准确地监测活细胞中MMP3的表达情况。
【英文摘要】	Objective:To study the construction of matrix metalloproteinase 3(MMP3)biosensor vector,and to illuminate the activated process of MMP3 in the living cells.Methods:The ECFP-MMP3-YPet biosensor vector anchored on cellular surface was constructed and identified.The MMP3 biosensor was transfected into the 293 T cells.The transfection efficiency was observed 24 hafter transfection.The flurorescence resonance energy transfer(FRET)-based MMP3 biosensor was observed by inversion fluorescence microscope.Results:The...
【基金】	国家自然科学基金资助课题(81160225,81260453,81360451); 新疆兵团医药卫生专项资助课题(2013BA020); 兵团国际交流与合作专项基金资助课题(2012BC002,2011BC004); 兵团科技创新团队专项基金资助课题(2014CC002)
【更新日期】	2016-04-05
【分类号】	TP212.3;R684.3
【正文快照】	骨关节炎(osteoarthritis,OA)是临床最为常见的关节病变,以软骨渐进性退变和关节功能障碍为主要特征,严重影响中老年人的生活质量。研究[1]表明:多种因素诸如年龄、性别、免疫反应、骨内压升高、细胞因子、基因多态性等均与OA病变有关,但是其具体的病理机制仍然不明。蛋白水解?

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