利用酵母双杂交系统筛选介体异沙叶蝉中与小麦矮缩病毒外壳蛋白互作的蛋白质-中国学术期刊网络出版总库

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利用酵母双杂交系统筛选介体异沙叶蝉中与小麦矮缩病毒外壳蛋白互作的蛋白质

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【英文篇名】	Screening of Putative Proteins in Vector Psammotettix alienus L. that are Interacted with Coat Protein of Wheat dwarf virus by a Split-ubiquitin Yeast Membrane System
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【作者】	赵艺泽; 刘艳; 王锡锋;
【英文作者】	ZHAO Yi-ze; LIU Yan; WANG Xi-feng; State Key Laboratory for Biology of Plant Diseases and Insect Pests; Institute of Plant Protection; Chinese Academy of Agricultural Sciences;
【作者单位】	中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室;
【文献出处】	中国农业科学 , Scientia Agricultura Sinica, 编辑部邮箱 2015年 12期期刊荣誉：中文核心期刊要目总览 ASPT来源刊中国期刊方阵 CJFD收录刊
【中文关键词】	异沙叶蝉; 小麦矮缩病毒; SMART技术; cDNA文库; 分离泛素酵母双杂膜系统;
【英文关键词】	leafhopper(Psammotettix alienus L.); Wheat dwarf virus(WDV); SMART technology; c DNA library; splitubiquitin yeast membrane system;
【摘要】	【目的】利用分离泛素酵母双杂交膜系统(split-ubiquitin yeast membrane system),以小麦矮缩病毒(Wheat dwarf virus,WDV)的外壳蛋白(CP)基因为诱饵对异沙叶蝉(Psammotettix alienus L.)c DNA文库进行筛选,研究异沙叶蝉传播WDV的分子机制。【方法】以笔者实验室饲养的异沙叶蝉为材料,提取其总RNA后取100 ng进行纯化,利用SMART法反转录合成ds c DNA,经过Sfi I酶切纯化,连接到p PR3-N文库载体上,构建得到以p PR3-N为载体的异沙叶蝉分离泛素酵母双杂交膜系统c DNA文库。同时,构建带有Sfi I酶切位点的诱饵载体p DHB1-WDV CP,经功能检测后用诱饵载体初步筛选p PR3-N空文库,寻找适合筛库的条件和确定His基因产物抑制剂3-氨基-1,2,4-三唑(3-AT)的使用浓度。然后用诱饵载体筛选异沙叶蝉c DNA文库,对筛选结果进行分析,再通过共转验证和β-半乳糖苷酶检测进一步验证是否发生互作。利用Uniprot和KEGG在线网站,对筛到的蛋白进行gene ontology(GO)注释和Pathw...
【英文摘要】	【Objective】To investigate the interaction between the leafhopper(Psammotettix alienus L.) and Wheat dwarf virus(WDV), a c DNA library of leafhopper was constructed using a split-ubiquitin yeast membrane system. The protein interaction analysis was done by using WDV CP as bait protein to screen a c DNA library of P. alienus. 【Method】Total RNA of leafhopper was isolated from 2 g of insects. Poly A+ RNA was enriched from 100 ng of total RNA and double-stranded c DNA was synthesized using SMART technology. Afte...
【基金】	国家自然科学基金(31272017); 国家公益性行业(农业)科研专项(201303021)
【更新日期】	2015-07-27
【分类号】	S435.12
【正文快照】	0引言【研究意义】异沙叶蝉(Psammotettix alienus L.)是一种重要的传毒介体昆虫,以持久性非增殖方式传播小麦矮缩病毒(Wheat dwarf virus,WDV)[1],该病毒引起的矮缩病是世界范围内小麦的重要病毒病害之一[2-3]。该病害于1961年首先在前捷克斯洛伐克报道,随后逐渐蔓延到欧洲、?

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