目的明确癌基因B-RafV600E在Mps1和B-RafWT/MEK/ERK通路之间自动调节的负反馈回路中抵抗作用的具体机制。方法 (1)Sbcl2转染B-RafWT和Mps1-KD,Western blot方法检测p-ERK水平;(2)向B-Raf野生型SK-MEL31、Sbcl2、WM35细胞及V600E突变型SK-MEL28、A375细胞中过表达Mps1,Western blot方法检测p-ERK水平;(3)在SK-MEL31、Sbcl2、WM35细胞中敲低AKT,转染Mps1,Western blot方法检测p-ERK水平;(4)在SK-MEL31、Sbcl2、WM35细胞中敲低内源性B-Raf,过表达外源性RafV600E,Western blot方法检测p-AKT水平;敲低SK-MEL-28、A375细胞中RafV600E,Western blot方法检测p-A K T水平。结果 (1)M p s 1激酶和B-RafWT/MEK/ERK通路之间的自动负反馈通路不依赖Mps1激酶的活性;(2)在野生型SK-MEL31、Sbcl2、WM35细胞中外源性Mps1的表达可诱导AKT磷酸化,抑制ERK活性;...
【英文摘要】
Objective To clarify the specific mechanism of oncogenic B-RafV600 E presenting resistance to the auto-regulatory negative feedback loop of Mps1 and B-RafWT/MEK/ERK signaling pathway. Methods(1) Sbcl2 cells were transfected with B-RafWT or Mps1-KD and the activity of p-ERK was analyzed by Western blot.(2)The p-ERK levels were detected by Western blot in SK-MEL31, Sbcl2 and WM35 cells which harbor B-RafWT, meanwhile the expression of p-ERK was also detected in SK-MEL28 and A375 cells which harbor B-RafV600 E...
【基金】
国家自然科学基金(81272189);
山西医科大学校创新基金(01201310)
【更新日期】
2015-10-09
【分类号】
R739.5
【正文快照】
科胞中RafV600E,Western blot方法检测p-A K T水平。结果(1)M p s 1激酶和B-RafWT/MEK/ERK通路之间的自动负反馈通路不依赖Mps1激酶的活性;(2)在野生型SK-MEL31、Sbcl2、WM35细胞中外源性Mps1的表达可诱导AKT磷酸化,抑制ERK活性;V600E突变型SK-MEL28、A375细胞中外源性Mps1的表
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