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空肠弯曲菌peb1A与大肠埃希菌ltB基因融合基因的构建、表达及鉴定  
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【英文篇名】 Construction,expression,and identification of a fusion gene from an outer membrane protein(peb1A)gene of Campylobacter jejuni and the heat-labile enterotoxin B subunit(ltB)gene of Escherichia coli
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【作者】 杜联峰; 夏墙; 余妍; 杨瑞; 宋明英; 孙万邦;
【英文作者】 DU Lian-feng; XIA Qiang; YU Yan; YANG Rui; SONG Ming-ying; SUN Wan-bang; Zunyi Medical College; Base for Graduate Education in Immunology in Guizhou Province;
【作者单位】 遵义医学院珠海校区贵州省免疫学研究生教育创新基地;
【文献出处】 中国病原生物学杂志 , Journal of Pathogen Biology, 编辑部邮箱 2015年 12期  
期刊荣誉:中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 Peb1A基因; ltB基因; 大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚单位; 原核表达; 黏膜佐剂; 基因融合;
【英文关键词】 Peb1Agene; ltB gene; Escherichia coli heat-labile enterotoxin B subunit; prokaryotic expression; mucosal adjuvant; gene fusion;
【摘要】 目的采用重叠PCR方法将大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚单位ltB基因和空肠弯曲菌外膜蛋白peb1A基因进行连接,构建ltB-peb1A融合基因原核表达系统,对其进行诱导表达与鉴定。方法利用PCR技术扩增ltB与peb1A基因,用重叠PCR法将ltB与peb1A基因进行融合,然后插入pET-28a(+)中,构建原核表达载体pET28a(+)-LtB-peb1A。用重组体转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白LTB-PEB1,SDS-PAGE分析重组蛋白表达情况,ELISA法鉴定其与牛Gm1活性,Western blot鉴定重组蛋白的反应原性。结果 PCR及测序证实ltB-peb1A融合基因原核表达载体pET28a(+)-LtB-peb1A构建成功,SDS-PAGE分析目的蛋白最高表达量占全菌总蛋白的28%左右,其分子质量单位为40.7ku。ELISA法鉴定纯化的重组蛋白与牛Gm1有结合活性,Western blot分析重组蛋白能被兔抗空肠弯曲菌识别。结论成功构建了ltB-peb1A融合基因原核表达载体,并获得高效表达的目的蛋白,为空肠弯曲菌黏膜免疫疫苗的研制奠定了基础。
【英文摘要】 Objectives To use overlapping PCR to construct a prokaryotic expression system for expression of the fusion gene ltB-peb1 Afrom the heat-labile enterotoxin B subunit(ltB)gene of Escherichia coli and an outer membrane protein(peb1A)gene of Campylobacter jejuni,to induce its expression,and to identify that gene. Methods The genes ltB and peb1 A were amplified with PCR.The ltB gene was fused with the peb1 Agene using overlapping PCR and the fusion gene was inserted into a pET-28a(+)prokaryotic expression vecto...
【基金】 贵州省教育厅自然科学研究项目(No.20090105)
【更新日期】 2016-02-04
【分类号】 R392
【正文快照】 空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)是一种重要的人畜共患病病原菌,自20世纪80年代起,世界卫生组织已将空肠弯曲菌病列为最常见的肠道传染病之一[1-2]。该菌与格林-巴利综合征(Guillain-Barrésyndrome,GBS)、反应性关节炎(reactive arthritis,RA)的发病密切相关[3]。临床上对空

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