目的构建欧洲型PRRSV重组腺病毒疫苗并对其免疫原性进行分析,为欧洲型PRRSV的感染预防提供依据。方法 PCR扩增欧洲型蓝耳病病毒ORF3、ORF5目的基因,将其连接到腺病毒穿梭载体,构建重组腺病毒穿梭质粒pacad-EU-ORF3、pacad-EU-ORF5、pacad-EU-ORF3-ORF5。将重组腺病毒穿梭质粒与骨架质粒共同转染至HEK 293细胞,构建重组腺病毒,并对构建的病毒用Western blot方法进行验证。用构建的重组腺病毒免疫BALB/c小鼠,通过淋巴细胞增殖试验对重组疫苗免疫效果进行初步评价。结果 Western blot显示重组腺病毒可稳定表达目的蛋白ORF3和ORF5,分子质量单位分别为30ku和22ku,与预期值相符。免疫小鼠淋巴细胞增殖试验显示重组腺病毒刺激指数均为PBS组1.5倍以上(P<0.05),且rAd-EU-ORF3-ORF5组显著高于rAd-EU-ORF3组和rAd-EU-ORF5组,表明重组腺病毒疫苗能够诱导机体淋巴细胞增殖,增强机体的细胞免疫应答水平。结论成功包装出重组腺病毒rAdEU-ORF3、rAd-EU-ORF5和rAd-EU-ORF3-ORF5,动物实...
【英文摘要】
Objectives To construct a recombinant adenovirus vaccine against the European porcine reproductive and respiratory syndrome virus(European PRRSV)and to analyze its immunogenicity in order to provide evidence for the prevention of European PRRSV infection. Methods The ORF3 gene and the ORF5 gene of the European PRRSV were amplified with RT-PCR and ligated to a shuttle vector,and the recombinant adenovirus plasmids pacad-EU-ORF3,pacadEU-ORF5,and pacad-EU-ORF3-ORF5 were constructed.The constructed plasmids wer...
***ORF5,and rAd-EU-ORF3-ORF5were successfully constructed.Animal experiments indicated that the recombinant ade-novirus vaccines had good immunogenicity.猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive andrespiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcin
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