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云南猪株旋毛虫43 ku抗原基因的原核表达  
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【英文篇名】 Prokaryotic expression and purification of the 43 ku excretory-secretory antigen gene of Trichinella spiralis from swine in Yunnan Province
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【作者】 王丽娜; 赵蕾; 邴玉艳; 高杨; 刘金霞; 刘芳馨; 陈晓宁;
【英文作者】 WANG Li-na; ZHAO Lei; BING Yu-yan; GAO Yang; LIU Jin-xia; LIU Fang-xin; CHEN Xiao-ning; Experimental Center of Pathogen Biology; Chengde Medical College;
【作者单位】 承德医学院病原生物学实验中心;
【文献出处】 中国病原生物学杂志 , Journal of Pathogen Biology, 编辑部邮箱 2015年 03期  
期刊荣誉：中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 旋毛虫; 43 ku抗原基因; 克隆; 原核表达; 纯化;
【英文关键词】 Trichinella spiralis; 43 ku excretory-secretory antigen gene; clone; prokaryotic expression; purification;
【摘要】 目的构建云南猪株旋毛虫43ku抗原基因原核表达载体,诱导其表达目的蛋白,为研究其功能奠定基础。方法收集云南株旋毛虫成虫,提取总RNA,采用RT-PCR获得43ku抗原基因。将PCR产物插入克隆载体pMD18-T中,重组质粒经酶切、PCR及测序鉴定正确后,将目的片段插入原核表达载体pET20b中并转化大肠埃希菌BL21,通过IPTG诱导表达目的蛋白,经镍柱亲和层析纯化后进行SDS-PAGE鉴定。结果 RT-PCR扩增出云南猪株旋毛虫43ku抗原基因,其基因序列全长1 134bp,与GenBank中注册的序列同源性最高为98.8%。重组表达质粒pET20b-Ts43经双酶切得到1 000bp和3 700bp左右两条片段,与预期结果相符。表达产物经SDS-PAGE鉴定,其分子质量单位为43ku。纯化蛋白经SDS-PAGE分析为单一43ku蛋白带。结论成功构建了云南猪株旋毛虫43ku抗原基因的原核表达载体,表达并纯化了43ku蛋白,为其功能研究奠定了基础。
【英文摘要】 Objectives To construct a prokaryotic expression vector for the 43 ku excretory-secretory antigen gene of Trichinella spiralis from swine in Yunnan Province and to express the protein of interest in order to study its function.Methods Adult T.spiralis was collected from swine in Yunnan Province,and its total RNA was extracted.The 43 ku excretory-secretory antigen gene was amplified with RT-PCR and inserted into a pMD18-T vector to construct a recombinant plasmid.The recombinant plasmid was subjected to doub...
【基金】 河北省高等学校科学技术研究重点项目(No.ZH2011125)
【更新日期】 2015-06-09
【分类号】 R383.15
【正文快照】 旋毛虫病(trichinellosis)是由旋毛虫(Trichinellaspiralis)引起的一种严重的人兽共患寄生虫病,其临床表现复杂多样,在诊断及治疗方面仍面临着诸多问题。肌肉活检查见囊包或幼虫是旋毛虫病最准确的诊断方法,但在早期或轻度感染者往往容易漏诊,而因取材的局限性晚期患者活检阳性

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