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【英文篇名】 |
Prokaryotic expression of PDI-4 from Giardia canis and determination of its location |
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【下载频次】 |
★★ |
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【作者】 |
吴娜;
吴威;
李玲丹;
宫鹏涛;
李建华;
杨举;
李赫;
张西臣; |
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【英文作者】 |
WU Na;
WU Wei;
LI Ling-dan;
GONG Peng-tao;
LI Jian-hua;
YANG Ju;
LI He;
ZHANG Xi-chen;
College of Veterinary Medicine;
Jilin University; |
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【作者单位】 |
吉林大学动物医学学院; |
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【文献出处】 |
中国病原生物学杂志
, Journal of Pathogen Biology, 编辑部邮箱
2015年 01期
期刊荣誉：中文核心期刊要目总览 ASPT来源刊 CJFD收录刊 |
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【中文关键词】 |
犬贾第鞭毛虫;
蛋白二硫键异构酶4;
滋养体;
免疫荧光定位;
腹鞭毛; |
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【英文关键词】 |
Giardia canis;
PDI-4;
trophozoite;
immunofluorescence;
ventral flagella; |
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【摘要】 |
目的克隆、表达二硫键异构酶4基因,并研究其在犬贾第鞭毛虫滋养体中的定位。方法根据GenBank登陆的贾第鞭毛虫二硫键异构酶4基因(gPDI-4)(登录号XM_001710176)序列,通过分析序列,设计合成一对gPDI-4引物。以犬贾第鞭毛虫滋养体总RNA为模板,采用反转录PCR的方法扩增PDI-4基因并克隆至pMD-18T载体,构建pMD-gPDI-4载体,再把目的基因亚克隆至pET-28a载体,构建表达载体pET-gPDI-4,转化入大肠埃希菌表达菌DE3中,经IPTG诱导后用SDS-PAGE分析表达情况。同时用组氨酸(His)结合树脂柱纯化PDI-4蛋白。用纯化的PDI-4蛋白免疫小鼠,之后收集血清作为一抗,通过免疫荧光法检测PDI-4在贾第鞭毛虫滋养体中的定位。结果反转录PCR(RT-PCR)扩增出大小为1 065bp的PDI-4基因,构建的pET-gPDI-4能高效表达gPDI-4蛋白,SDS-PAGE显示表达蛋白分子质量为36ku。免疫荧光试验显示贾第鞭毛虫PDI-4蛋白除定位于细胞表面、内质网和腹部吸盘外,主要存在于腹部鞭毛。结论成功克隆、表达了犬贾第鞭毛虫PDI-4基因,并确定其主要在腹鞭毛表... |
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【英文摘要】 |
Objectives To clone and express the protein gPDI-4and to determine its location in Giardia canis trophozoites. Methods A pair of primers(gPDI-4)was designed and synthesized in accordance with the gPDI-4sequence in GenBank(XM_001710176).The total RNA of trophozoites was extracted to amplify gPDI-4using RT-PCR.The identified gene was cloned into a pMD-18 Tvector to generate pMD-gPDI-4,and the gPDI-4fragment was then sub-cloned into apET-28 avector to construct the expression vector pET-gPDI-4.The recombinant ... |
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【基金】 |
国家自然科学基金项目(No.31101804,30970322) |
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【更新日期】 |
2015-04-07 |
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【分类号】 |
R383.14 |
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【正文快照】 |
***贾第鞭毛虫是一种原生动物,能感染人类和其他哺乳动物,导致肠道疾病-贾第鞭毛虫病[1,2]。在一个生命周期中,贾第鞭毛虫分滋养体和包囊两种形式存在。滋养体具有复制和能动性,定殖于宿主的十二指肠,而包囊有一个致密的蜂窝壁,在外界具有较强的抵抗能力,且具有传染性。目前关? |
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