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小鼠H1foo逆转录病毒载体的构建及表达  
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【英文篇名】 Construction and expression of retroviral vector pMX-H1foo in mouse embryonic fibroblast
【下载频次】 ★★
【作者】 许荣; 张春林; 宁静; 李建; 雷安民;
【英文作者】 XU Rong; ZHANG Chun-lin; NING Jing; LI Jian; LEI An-min; College of Veterinary Medicine; Northwest A&F University; Department of Geriatrics; Xijing Hospital; Forth Militarg Medical University;
【作者单位】 西北农林科技大学动物医学院; 第四军医大学西京医院老年病科;
【文献出处】 西北农林科技大学学报(自然科学版) , Journal of Northwest A & F University(Natural Science Edition), 编辑部邮箱 2015年 05期  
期刊荣誉：中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  中国期刊方阵  CJFD收录刊
【中文关键词】 H1foo基因; 逆转录病毒载体; 多潜能性干细胞;
【英文关键词】 H1foo gene; retroviral vector; induced pluripotent stem cell;
【摘要】 【目的】构建小鼠pMX-H1foo逆转录病毒载体,并使其在小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)中异位表达,为进一步研究H1foo在重编程方面的作用奠定理论基础。【方法】根据NCBI公布的小鼠H1foo基因的mRNA序列设计引物,以小鼠卵巢组织总RNA为模板,RT-PCR扩增小鼠H1foo CDS序列,并连接到逆转录病毒载体pMX上。经双酶切鉴定和测序比对正确后,利用磷酸钙转染包装细胞plat-E的方法制备H1foo病毒液并感染MEF细胞,进一步收集感染的细胞进行半定量RT-PCR和免疫荧光染色检测,分析其在细胞中的表达情况。【结果】克隆得到915bp的H1foo基因,构建得到逆转录病毒载体pMX-H1foo。该载体制备的病毒能够感染MEF细胞,并且H1foo在MEF细胞中与细胞核共定位,而对照组绿色荧光蛋白(GFP)遍布整个细胞。【结论】成功构建了pMX-H1foo逆转录病毒载体,并在MEF中进行表达。
【英文摘要】 【Objection】This study constructed and expressed recombinant retroviral plasmid pMXH1 foo in mouse embryonic fibroblast(MEF)cells to further investigate the function of H1 foo in the induced pluripotent stem cell.【Method】Primers of H1 foo were designed according to the published mRNA sequence of mouse oocyte-specific linker histone(H1foo:NM_138311.2)in NCBI database.The CDS of H1 foo was amplified from RNA of mouse ovary using RT-PCR and then cloned into the retroviral vector pMX.The recombinant retroviral p...
【基金】 国家自然科学基金项目(31172280)
【更新日期】 2015-10-19
【分类号】 Q78
【正文快照】 卵母细胞特异性连接组蛋白(oocyte-specificlinker histone,H1foo)是组蛋白家族的成员之一,在哺乳动物卵母细胞和早期胚胎中特异性表达,对卵母细胞的发育、成熟、受精和早期胚胎的发育发挥着重要的作用。H1foo最早由Tanaka通过消减杂交的方法从小鼠中克隆得到,是卵中特异性表达

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