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定点突变对酰胺水解酶DamH可溶性表达和酶活的影响  
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【英文篇名】 Effect of site-directed mutagenesis on soluble expression and specific activity of amide hydrolase Dam H
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【作者】 王飞; 李周坤; 周杰; 崔中利;
【英文作者】 Fei Wang; Zhoukun Li; Jie Zhou; Zhongli Cui; Jiangxi Engineering Laboratory for the Development and Utilization of Agriculture Microbial Resources; College of Bioscience and Bioengineering; Jiangxi Agriculture University; Key Laboratory of Agricultural Environmental Microbiology; Ministry of Agriculture; Nanjing Agriculture University;
【作者单位】 江西省农业微生物资源开发与利用工程实验室; 江西农业大学生物科学与工程学院; 南京农业大学生命科学学院; 农业部农业环境微生物工程重点实验室;
【文献出处】 微生物学报 , Acta Microbiologica Sinica, 编辑部邮箱 2015年 12期  
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【中文关键词】 DamH; 定点突变; 催化三联体; 可溶性表达; 比酶活;
【英文关键词】 Dam H; site-directed mutagenesis; catalytic triad; soluble expression; specific activity;
【摘要】 【目的】Dam H是一种具有酯酶活性的酰胺水解酶,其非活性中心氨基酸残基的突变对重组酶可溶性表达和比酶活产生一定的影响。拟探索Dam H的活性中心氨基酸残基构成,并对其非活性中心氨基酸残基突变对可溶性表达和比酶活的影响进行研究。【方法】通过重叠延伸的方法对Dam H可能的活性中心氨基酸S149、E244和H274以及非活性中心氨基酸D165及N192进行定点突变,通过静息细胞测活验证了S149、E244和H274在催化2-氯-N-(2’-甲基-6’-乙基苯基)乙酰胺(CMEPA)水解反应中的作用,通过Ni2+-NTA亲和层析对D165及N192突变子进行纯化,对突变株和野生型比酶活进行比较。【结果】研究表明S149A使Dam H的CMEPA水解酶活性下降为野生型的5%,E244A和H274A突变导致其失去活性;D165P和N192P突变影响到Dam H的可溶性表达,表达量分别为野生型的28.2%和20.8%,突变子N192P、D165P比酶活分别为野生型比酶活的55.5%和49.7%。【结论】Dam H催化酯类底物和芳基酰胺类底物可能共用同一活性中心S149、E244和H274,其两个α螺旋的转角处氨基酸侧链...
【英文摘要】 [Objective] Dam H is a bifunctional hydrolase that hydrolyzes the amide and ester bonds. Previous studies demonstrated that mutagenesis of non-catalytic residues shows a negative impact on the soluble expression and specific activity of Dam H. Therefore,we studied the catalytic triad of Dam H and the effect of non-catalytic mutagenesis on the soluble expression and specific activity of Dam H. [Methods] We performed site-directed mutation experiment of the 3possible catalytic sites: S149,E244 and H274 and th...
【基金】 国家自然科学基金地区科学项目(31560031),国家自然科学基金面上项目(31570059)~~
【更新日期】 2015-12-15
【分类号】 Q78
【正文快照】 氯代乙酰胺类除草剂因分子结构中具有酰胺基团(CONH-)而得名,因其高效、高选择性而在全球范围内广泛使用[1]。乙草胺[2’-乙基-6’-甲基-N-(乙氧基甲基)-2-氯代-N-乙酰苯胺]是氯代乙酰胺类除草剂的重要代表,主要用于一年生禾本科杂草和部分阔叶杂草的防除[2]。大量使用氯乙酰胺

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