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人LIGHT-Fc融合蛋白在毕赤酵母中的表达及鉴定  
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【英文篇名】 Expression and identification of human LIGHT-Fc fusion protein in Pichia pastoris
【下载频次】 ★★★
【作者】 郝文丽; 赵勇; 任华; 江文正;
【英文作者】 HAO Wen-li; ZHAO Yong; REN Hua; JIANG Wen-zheng; School of Life Sciences; East China Normal University;
【作者单位】 华东师范大学生命科学学院; 上海实验动物研究中心;
【文献出处】 中国生物制品学杂志 , Chinese Journal of Biologicals, 编辑部邮箱 2015年 08期  
期刊荣誉:中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 LIGHT; 毕赤酵母; 基因表达;
【英文关键词】 LIGHT; Pichia pastoris; Gene expression;
【摘要】 目的利用酵母表达系统制备人LIGHT-Fc融合蛋白。方法利用基因工程方法构建含人LIGHT胞外段基因和人Ig G4 Fc基因的重组质粒p PIC9K-LIGHT-Fc,经SalⅠ线性化后电转化感受态酵母菌GS115,PCR鉴定重组转化子。将阳性重组转化子经甲醇诱导表达后,RT-PCR法检测目的基因的转录水平,SDS-PAGE及Western blot法进行表达产物的鉴定。结果表达质粒p PIC9K-LIGHT-Fc经酶切及测序鉴定,证明构建正确。10个重组子均为Mut+型阳性转化子,经甲醇诱导后可扩增出特异性目的基因片段。表达的重组LIGHT-Fc融合蛋白相对分子质量约45 000,可与鼠抗人LIGHT多克隆抗体发生特异性结合。结论人LIGHT-Fc融合蛋白在毕赤酵母中已成功获得了表达,为进一步开展其生物学功能的研究奠定了基础。
【英文摘要】 Objective To prepare human LIGHT-Fc fusion protein by using yeast expression system. Methods The recombinant plasmid p PIC9K-LIGHT-Fc containing the gene of outer membrane domain of human LIGHT and human Ig G4 Fc was constructed by genetic engineering technology, linearized with Sal Ⅰ and electrotransformed to competent yeast GS115. The recombinant transformants were identified by PCR, of which the positive ones were induced with methanol. The transcription level of target gene was determined by RT-PCR, whi...
【基金】 国家自然科学基金(81072459); 教育部新世纪优秀人才支持计划(NCET-12-0179); 上海市“科技创新行动计划”实验动物领域科技支撑项目(14140904200)
【更新日期】 2015-09-07
【分类号】 R3411
【正文快照】 肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)超家族成员可诱导多种生物学效应,包括细胞的生长、分化及死亡,其家族成员在炎症反应的调节、对感染的免疫反应以及组织的自稳态中均起到了重要的作用。LIGHT是TNF家族具有特殊作用的成员之一, 不仅可调节肿瘤细胞凋亡[1-2],还可共刺?

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