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HIV-1 Vpu蛋白在毕赤酵母中的表达和纯化  
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【英文篇名】 Expression of human immunodeficiency virus type 1 Vpu protein in Pichia pastoris and purification of expressed product
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【作者】 王娇; 刘伟; 胡秦; 李泽琳; 曾毅;
【英文作者】 WANG Jiao; LIU Wei; HU Qin; LI Ze-lin; ZENG Yi; College of Life Science and Bioengineering; Beijing University of Technology;
【作者单位】 北京工业大学生命科学与生物工程学院; 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所;
【文献出处】 中国生物制品学杂志 , Chinese Journal of Biologicals, 编辑部邮箱 2015年 04期  
期刊荣誉：ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 人类免疫缺陷病毒1型; Vpu蛋白; 毕赤酵母; 表达; 纯化;
【英文关键词】 Human immunodeficiency virus type 1(HIV-1); Vpu protein; Pichia pastoris; Expression; Purification;
【摘要】 目的在毕赤酵母中表达并纯化人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)辅助调节蛋白Vpu。方法从质粒p CDNA3.1-vphu中PCR扩增vphu基因,插入毕赤酵母表达载体p PICZαA,构建重组表达质粒p PICZαA-vphu,转化巴斯德毕赤酵母野生型X33菌株,经甲醇诱导表达带有6×His标签的重组Vpu蛋白。表达产物经Ni-Agarose 6×His标签纯化柱纯化。表达和纯化产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。结果重组表达质粒p PICZαA-vphu经双酶切和测序鉴定证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约16 000,主要存在于细胞内;纯化后杂蛋白减少,与抗VPU抗体和抗His标签抗体均可结合,浓度为224μg/ml。结论利用毕赤酵母表达系统成功表达并纯化了HIV-1 Vpu蛋白,纯化的蛋白具有良好的抗原活性,为进一步研究其结构和功能以及靶点药物筛选模型的建立奠定了基础。
【英文摘要】 Objective To express the Vpu protein of human immunodeficiency virus type 1(HIV-1) in Pichia pastoris and purify the expressed product. Methods The vphu gene was amplified from plasmid p CDNA3. 1-vphu by PCR and inserted into expression vector p PICZαA. The constructed recombinant plasmid p PICZαA-vphu was transformed to wild type P. pastoris X33 strain and induced with methanol. The expressed 6 × His-tagged Vpu protein was purified by NiAgarose column chromatography. The expressed and purified proteins wer...
【基金】 国家自然科学基金(81202976); 北京市自然科学基金(7142013)
【更新日期】 2015-05-21
【分类号】 Q78
【正文快照】 Vpu蛋白是人类免疫缺陷病毒1型(human immu-nodeficiency virus type 1,HIV-1)特有的辅助调节蛋白,由Rev依赖的双顺反子m RNA编码,含有81个氨基酸,属于Ⅰ型跨膜蛋白,相对分子质量约为16 000。Vpu蛋白的N-末端为胞外区,第1~27位氨基酸上存在信号肽和疏水的膜锚定位点(membrane a

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