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【英文篇名】 |
Establishment of SYBR Green I real-time RT-PCR method for detecting Macrobrachium rosenbergii nodavirus |
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【下载频次】 |
★★★★☆ |
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【作者】 |
黄光华;
童桂香;
黎小正;
李旻;
黄国秋;
卢小花;
陈静;
吴明媛;
韦信贤; |
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【英文作者】 |
HUANG Guang-hua;
TONG Gui-xiang;
LI Xiao-zheng;
LI-Ming;
HUANG Guo-qiu;
LU Xiao-hua;
CHEN Jing;
WU Ming-yuan;
WEI Xin-xian;
Guangxi Academy of Fishery Science; |
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【作者单位】 |
广西水产科学研究院; |
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【文献出处】 |
南方农业学报
, Journal of Southern Agriculture, 编辑部邮箱
2015年 11期
期刊荣誉：中文核心期刊要目总览 ASPT来源刊 CJFD收录刊 |
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【中文关键词】 |
罗氏沼虾;
野田村病毒;
白尾病;
一步法实时荧光定量RT-PCR;
检测; |
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【英文关键词】 |
M.rosenbergii;
nodavirus;
white tail disease;
one-step SYBR Green I real-time RT-PCR;
detection; |
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【摘要】 |
【目的】建立一种检测罗氏沼虾野田村病毒(Macrobrachium rosenbergii nodavirus,MrNV)的实时荧光定量RT-PCR,为防控罗氏沼虾白尾病(White tail disease,WTD)提供技术支持。【方法】将MrNV衣壳蛋白基因片段(No.HQ287005)克隆到pGM-T载体,选取阳性重组质粒用SalⅠ酶切获得线性化转录模板DNA,经体外转录获得标准品RNA;在MrNV基因序列的保守区域设计1对扩增片段为119 bp的特异性引物,以标准品RNA为模板进行引物浓度筛选及标准曲线制定,并对建立的检测方法进行标准曲线和融解曲线分析及特异性、敏感性、重复性、临床样品检验试验。【结果】建立的一步法实时荧光定量RT-PCR定量范围宽,检测模板范围在1×10~1~1×10~8拷贝/μL时,其标准曲线呈良好的线性关系;融解曲线表现为单一波峰,T_m为81.17~81.25℃;扩增曲线呈明显的S形,以C_t值35.00为界限,灵敏度约为10个病毒粒子,是常规RT-PCR的1000倍。该方法仅对MrNV具有良好的特异性,其组内和组间试验的C_t值变异系数分别为0.15%~0.83%和0.56%... |
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【英文摘要】 |
[Objective]The present experiment was conducted to establish SYBR Green I real-time RT-PCR method for detecting Macrobrachium rosenbergii nodavirus(MrNV),in order to provide technical support for prevention and control of white tail disease(WTD).[Method]The gene fragment(No.HQ287005) of MrNV capsid protein were cloned into pGM-T vector.And the positive linearized plasmids,which were obtained through restriction enzyme Sal I digestion,was used as template DNA for transcription.The RNA standards were obtained... |
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【基金】 |
广西水产畜牧兽医局科技推广应用项目(桂渔牧科201452005,桂渔牧科201452037);
广西直属公益性科研院所基本科研业务费项目(GXIF-2012-08) |
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【更新日期】 |
2016-02-05 |
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【分类号】 |
S945.41 |
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【正文快照】 |
(Guangxi Academy of Fishery Science,Nanning 530021,China)0引言【研究意义】罗氏沼虾野田村病毒(Macrobrachi-um rosenbergii nodavirus,Mr NV)是罗氏沼虾白尾病(White tail disease,WTD)的主要病原,重点为害罗氏沼虾淡化苗,导致病虾出现肌肉白浊、白斑或白尾的症状,且短期 |
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