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罗氏沼虾野田村病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立  
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【英文篇名】 Establishment of SYBR Green I real-time RT-PCR method for detecting Macrobrachium rosenbergii nodavirus
【下载频次】 ★★★★☆
【作者】 黄光华; 童桂香; 黎小正; 李旻; 黄国秋; 卢小花; 陈静; 吴明媛; 韦信贤;
【英文作者】 HUANG Guang-hua; TONG Gui-xiang; LI Xiao-zheng; LI-Ming; HUANG Guo-qiu; LU Xiao-hua; CHEN Jing; WU Ming-yuan; WEI Xin-xian; Guangxi Academy of Fishery Science;
【作者单位】 广西水产科学研究院;
【文献出处】 南方农业学报 , Journal of Southern Agriculture, 编辑部邮箱 2015年 11期  
期刊荣誉:中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 罗氏沼虾; 野田村病毒; 白尾病; 一步法实时荧光定量RT-PCR; 检测;
【英文关键词】 M.rosenbergii; nodavirus; white tail disease; one-step SYBR Green I real-time RT-PCR; detection;
【摘要】 【目的】建立一种检测罗氏沼虾野田村病毒(Macrobrachium rosenbergii nodavirus,MrNV)的实时荧光定量RT-PCR,为防控罗氏沼虾白尾病(White tail disease,WTD)提供技术支持。【方法】将MrNV衣壳蛋白基因片段(No.HQ287005)克隆到pGM-T载体,选取阳性重组质粒用SalⅠ酶切获得线性化转录模板DNA,经体外转录获得标准品RNA;在MrNV基因序列的保守区域设计1对扩增片段为119 bp的特异性引物,以标准品RNA为模板进行引物浓度筛选及标准曲线制定,并对建立的检测方法进行标准曲线和融解曲线分析及特异性、敏感性、重复性、临床样品检验试验。【结果】建立的一步法实时荧光定量RT-PCR定量范围宽,检测模板范围在1×10~1~1×10~8拷贝/μL时,其标准曲线呈良好的线性关系;融解曲线表现为单一波峰,T_m为81.17~81.25℃;扩增曲线呈明显的S形,以C_t值35.00为界限,灵敏度约为10个病毒粒子,是常规RT-PCR的1000倍。该方法仅对MrNV具有良好的特异性,其组内和组间试验的C_t值变异系数分别为0.15%~0.83%和0.56%...
【英文摘要】 [Objective]The present experiment was conducted to establish SYBR Green I real-time RT-PCR method for detecting Macrobrachium rosenbergii nodavirus(MrNV),in order to provide technical support for prevention and control of white tail disease(WTD).[Method]The gene fragment(No.HQ287005) of MrNV capsid protein were cloned into pGM-T vector.And the positive linearized plasmids,which were obtained through restriction enzyme Sal I digestion,was used as template DNA for transcription.The RNA standards were obtained...
【基金】 广西水产畜牧兽医局科技推广应用项目(桂渔牧科201452005,桂渔牧科201452037); 广西直属公益性科研院所基本科研业务费项目(GXIF-2012-08)
【更新日期】 2016-02-05
【分类号】 S945.41
【正文快照】 (Guangxi Academy of Fishery Science,Nanning 530021,China)0引言【研究意义】罗氏沼虾野田村病毒(Macrobrachi-um rosenbergii nodavirus,Mr NV)是罗氏沼虾白尾病(White tail disease,WTD)的主要病原,重点为害罗氏沼虾淡化苗,导致病虾出现肌肉白浊、白斑或白尾的症状,且短期

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