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应用重组慢病毒表达载体建立抑癌基因WTX稳定高表达结直肠癌SW620细胞系  
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【英文篇名】 Establishment of a colorectal cancer SW620 cell line stably over-expressing Wilm's tumor on X chromosome using a recombinant lentivirus vector
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【作者】 马文霞; 贺莉; 刘椿; 张庆玲; 丁彦青;
【英文作者】 MA Wenxia; HE Li; LIU Chun; ZHANG Qingling; DING Yanqing; Department of Pathology; School of Basic Medical Sciences; Key laboratory of Molecular Tumor Pathology of Guangdong Province; 264 Hospital of PLA; Nanfang Hospital; Southern Medical University;
【作者单位】 南方医科大学病理系//广东省分子肿瘤病理学重点实验室; 中国人民解放军264医院; 南方医科大学南方医院;
【文献出处】 南方医科大学学报 , Journal of Southern Medical University, 编辑部邮箱 2015年 08期  
期刊荣誉:中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 Wilm's tumor on X chromosome; 慢病毒载体; 稳定转染; 结直肠癌;
【英文关键词】 Wilms tumor on X chromosome; lentivirus vector; transfection; colorectal cancer;
【摘要】 目的构建WTX CDS区全长重组慢病毒表达载体,感染结直肠癌SW620细胞,建立WTX稳定高表达结直肠癌SW620细胞株。方法将WTX基因全长CDS区插入GV287慢病毒质粒载体,重组载体与包装载体共转染人胚肾293T细胞,收集上清、浓缩得到表达WTX的重组慢病毒。慢病毒感染结直肠癌SW620细胞,荧光显微镜初步观察感染效率,G418进一步筛选得到稳定感染细胞株。QPCR及Western blotting检测WTX过表达效率。每部分均设立相应对照。结果载体片段测序结果示成功构建了WTX重组表达载体;包装病毒滴度检测适中,提示WTX表达慢病毒包装成功;慢病毒感染结直肠癌SW620细胞后,WTX基因m RNA以及蛋白表达水平明显增高,有统计学意义,提示SW620结直肠癌细胞WTX高表达稳定株构建成功。结论建立慢病毒感染方法的结直肠癌SW620细胞WTX过表达稳定细胞株,为进一步研究WTX对结直肠癌发生、发展的作用机制提供分子生物学工具。
【英文摘要】 Objective To construct a recombinant lentivirus vector for Wilm's tumor on X chromosome(WTX) gene and establish a colorectal cancer SW620 cell line with stable WTX over-expression. Methods The full length coding region of WTX gene was amplified with PCR, and the amplified fragment was cloned into the lentivirus vector GV387. The recombinant lentivirus vector was transfected in 293 T cells for packaging the virus, which was then transfected into colorectal cancer SW620 cells. The stably transfected cells wer...
【基金】 国家自然基金(81472712,81071989); 广东省科技计划项目(c1221020700008); 山西省自然科学基金(2014011037-5)~~
【更新日期】 2015-08-12
【分类号】 R735.34
【正文快照】 WTX(Wilm's tumor on X chromosome,又称FAM123B、AMER1、OSCS)是首个被发现定位于X染色体上的抑癌基因[1]。WTX于2007年首次在《Science》上被报道,并被认为在正常器官发育过程中发挥重要[2];在肿瘤等疾病相关研究方面,WTX先后被证实在Wilms瘤[3],合并有颅骨硬化症的条纹状骨?

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