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抗钠泵α2亚单位截断性片段多肽抗体的制备与鉴定  
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【英文篇名】 Preparation and characterization of polyclonal antibodies against rat sodium pump alpha 2 subunit M1-M2 extra membrane fragment
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【作者】 张明娟; 张美程; 朱参战; 张超英; 段宗明;
【英文作者】 ZHANG Mingjuan; ZHANG Meicheng; ZHU Canzhan; ZHANG Chaoying; DUAN Zongming; Department of Cardiology; Second Affiliated Hospital of Xi'an Jiaotong University;
【作者单位】 西安交通大学医学院第二附属医院心内科;
【文献出处】 南方医科大学学报 , Journal of Southern Medical University, 编辑部邮箱 2015年 02期  
期刊荣誉：中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 钠泵; 钠泵α2亚单位; 多肽; 抗体;
【英文关键词】 sodium pump; sodium pump alpha 2 subunit M1-M2 extra membrane fragment; peptide; antibody;
【摘要】 目的采用多肽制备技术和免疫学技术制备抗钠泵α2亚单位截断性片段及其抗体,为检测和研究钠泵α2亚单位的组织学分布及其功能研究提供实验基础。方法根据NCBI-Genebank获得大鼠钠泵α2亚单位M1~M2膜外区截断性片段目的多肽(LAAMEDEPSNDN),采用9-氟甲氧羰基(Fmoc)固相合成法合成目的多肽,并采用碳化二亚胺法制备出多肽与孔戚血蓝素复合物,免疫新西兰大白兔,免疫4次后获得抗血清,测定其效价。随后采用protein A纯化Ig G抗体,并将其用于大鼠主动脉血管平滑肌细胞钠泵α2亚单的组织学检测。结果(1)人工合成的大鼠钠泵α2亚单位截断性片段长13氨基酸残基(LAAMEDEPSNDN-C),理论相对分子质量:1408.48,质谱实测相对分子质量:1407.90;高效色谱分析纯度HPLC纯度>85.5%;(2)ELISA法检测免疫后兔子的抗血清效价均大于1∶512 000,蛋白A亲和纯化获得亲和纯化抗体浓度为0.965 mg/ml,按照1∶1000稀释(终浓度1μg/ml),ELISA检测抗体效价为1∶256 000;(3)该抗体按照1∶100~1∶200稀释可用于免疫细胞学检测。结论成功制备高效...
【英文摘要】 Objective To prepare polyclonal antibodies against sodium pump alpha 2 subunit M1-M2 extramembrane fragment(NKAα2 EM1) for studying the pathogenesis of hypertension. Methods According to the Gen Bank data, the amino acid sequence of NKAα2 EM1 was obtained and the target peptide(LAAMEDEPSNDN) was synthesized using a peptide synthesizer with Fmoc method and purified with high-performance liquid chromatography. The synthesized peptide was then coupled to KLH for immunizing New Zealand white rabbits for 4 times...
【基金】 国家自然科学基金(30500204); 教育部新世纪优秀人才支持计划(NCET-13-0464)~~
【更新日期】 2015-03-05
【分类号】 R392
【正文快照】 钠泵,也称Na+/K+-ATP酶(Na,K-ATPase,NKA),是由α、β、γ亚基组成的真核细胞跨膜蛋白[1-4],不仅是调节细胞膜内外的离子平衡、诱发/维持膜电位的最重要离子泵,也是EGFR/Src-Ras-ERK、PI3K1A-PDK-Akt、m TOR等信号通路中的重要受体[5-8],在维持真核细胞正常电生理功能,参与腺体

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