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野生型枯草芽孢杆菌N4的spizizen转化法优化  
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【英文篇名】 Optimization of the spizizen method for wild-type Bacillus subtilis N4 transformation
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【作者】 李春艳; 冯凤兆; 冯露; 成毅; 成小松;
【英文作者】 LI Chunyan; FENG Fengzhao; FENG Lu; CHENG Yi; CHENG Xiaosong; School of Resources and Environmental Sciences; Northeast Agricultural University; School of First Clinical Medicine; Harbin Medical University;
【作者单位】 东北农业大学资源与环境学院; 哈尔滨医科大学第一临床医学院;
【文献出处】 东北农业大学学报 , Journal of Northeast Agricultural University, 编辑部邮箱 2015年 02期  
期刊荣誉：中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 野生型枯草芽孢杆菌; spizizen转化法; 有机溶剂; 溶菌酶; SDS-PAGE;
【英文关键词】 wild-type Bacillus subtilis; spizizen method; organic solvents; lysozyme; SDS-PAGE;
【摘要】 采用经典Spizizen方法将已构建的大片段重组质粒p HT01-nit(nit为腈水解酶基因)转化野生型枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis N4,无法获得转化子。研究对Spizizen方法进行改进,分别在感受态制备及转化过程中加入有机溶剂及溶菌酶,并对有机溶剂种类、浓度,溶菌酶浓度,质粒与感受态共培养时间进行优化,提高转化效率,构建Bacillus subtilis N4-p HT01-nit。经IPTG诱导,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Polyacryamide gel electrophoresis,PAGE)验证nit在野生型枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis N4中的表达。结果表明,最优条件为在感受态制备过程中添加4%的Tween-80,转化过程中添加5μg·m L-1溶菌酶,感受态与质粒共培养时间为1 h,条件优化后可得到37个转化子·μg-1DNA。在SDS-PAGE上可以看到与腈水解酶分子质量一致的蛋白条带。说明该优化后的方法效果明显,适合于大片段重组质粒转化野生型枯草芽孢杆菌。
【英文摘要】 The constructed large recombinant plasmid could not be transformed into the wild-type Bacillus subtilis N4 by traditional spizizen method. In this study, we optimized the spizizen method by adding organic solvents and lysozyme in preparation and transformation of competent cells. The types and concentrations of organic solvent, the concentrations of lysozyme, co- culture time of plasmids and competent cells were studied for improving transformation efficiency to construct Bacillus subtilis N4 PHT01-nit. Aft...
【基金】 国家自然科学基金资助项目(41271504)
【更新日期】 2015-03-31
【分类号】 X172
【正文快照】 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是革兰氏阳性好氧细菌,内生抗逆孢子,细胞壁不含内毒素,无致病性,直接分泌多种蛋白到培养基中,有些枯草芽孢杆菌还能形成生物膜,因此常被用作一些重要工业酶制剂的生产菌,亦可应用到环境污染的治理中[1-2]。自枯草芽孢杆菌168菌株被Spizizen[3]

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