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带有标记基因自删除系统的穿梭载体的构建与功能鉴定  
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【英文篇名】 Construction and Function Verification of a Novel Shuttle Vector Containing a Marker Gene Self-deletion System
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【作者】 李莉莉; 王湛; 周玉柏; 张芳; 沈思嗣; 李泽琳; 曾毅;
【英文作者】 LI Lili; WANG Zhan; ZHOU Yubai; ZHANG Fang; SHEN Sisi; LI Zelin; ZENG Yi; Beijing Key Laboratory of Environmental and Viral Oncology; College of Life Science and Bio-Engineering; Beijing University of Technology; State Key Laboratory for Infectious Disease Prevention and Control; National Institute for Viral Disease Control and Prevention; Chinese Center for Disease Control and Prevention;
【作者单位】 北京工业大学生命科学与生物工程学院环境病毒学北京市重点实验室; 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室;
【文献出处】 病毒学报 , Chinese Journal of Virology, 编辑部邮箱 2015年 05期  
期刊荣誉：中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 穿梭质粒; MVA; 标记基因; 同源重组; HPV; 疫苗;
【英文关键词】 Shuttle plasmid; Modified vaccinia virus Ankara(MVA); Marker gene; Homologous recombi-nation; Human papillomavirus(HPV); Vaccine;
【摘要】 构建一个具有标记基因自动删除功能的穿梭质粒载体pZL-EGFP,用于快速准确地筛选符合临床试验要求的携带有外源目标基因的重组痘苗病毒MVA(rMVA)。为构建pZL-EGFP,将原有穿梭质粒pSC11的标记基因由LacZ置换成EGFP基因,并在EGFP基因的两侧插入TKL的同源序列。pZL-EGFP与MVA病毒共转染BHK-21细胞后经10代传代,一次噬斑筛选以获得携带有外源基因且EGFP已被删除的rMVA。最终获得的rMVA通过PCR和Western Blot方法对pZL-EGFP的功能进行鉴定。成功构建出具有标记基因自动删除功能的穿梭质粒载体pZL-EGFP,包装获得的重组痘苗病毒可在传代过程中自动删除标记基因EGFP。基因删除未影响重组病毒的活力,外源蛋白的表达具有良好的稳定性。pZL-EGFP能与MVA病毒在BHK-21细胞内发生同源重组并包装出rMVA,其携带的标记基因可在病毒传代过程中通过分子内同源重组被自动删除,基因删除不影响重组病毒的活力及外源基因的表达,这为进一步的研究奠定了坚实的基础。
【英文摘要】 For rapid and accurate screening of recombinant modified vaccinia virus Ankara(rMVA)that satisfied the quality standards of clinical trials,a novel shuttle vector that can delete the marker gene automatically during virus propagation was constructed:pZL-EGFP.To construct the pZL-EGFP,the original shuttle vector pSC11 was modified by replacing the LacZ marker gene with enhanced green fluorescent protein(EGFP)and then inserting homologous sequences of TKL into the flank regions of EGFP.Baby hamster kidney(BHK...
【基金】 北京市教委科技创新平台(PXM2014_014204_07_000048); 食管癌血清学早期诊断和人乳头瘤病毒(HPV)新型疫苗的研发(2012AA02A404)863项目; 国家科技重大专项(2012ZX10001005); 北京市教委科技创新平台(PXM2014_014204_07_000046)
【更新日期】 2015-10-21
【分类号】 Q78
【正文快照】 改良型痘苗病毒安卡拉株(Modified vacciniavirus Ankara,MVA)是高度减毒的痘苗病毒毒株,是在人类寻求高度减毒的痘苗病毒作为天花疫苗的过程中获得的一个非复制型病毒株[1]。在人细胞内,MVA起始了复制,但是不能繁殖生长而产生有感染性的成熟颗粒,从而使之具有了良好的安全性。

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