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【英文篇名】 |
Research on Key Factors Restricting Efficiency of Sperm-Mediated Gene Transfer |
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【下载频次】 |
★★★★ |
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【作者】 |
焦明霞;
牟彦双;
格日乐其木格;
张琳琳;
孔庆然;
付海鹏;
刘忠华; |
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【英文作者】 |
JIAO Ming-xia;
MU Yan-shuang;
BOU Gerelchimeg;
ZHANG Lin-lin;
KONG Qing-ran;
FU Hai-peng;
LIU Zhong-hua;
College of Life Science;
Northeast Agricultural University; |
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【作者单位】 |
东北农业大学生命科学学院; |
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【文献出处】 |
中国农业科学
, Scientia Agricultura Sinica, 编辑部邮箱
2014年 20期
期刊荣誉：中文核心期刊要目总览 ASPT来源刊 中国期刊方阵 CJFD收录刊 |
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【中文关键词】 |
精子介导转基因;
DNA浓度;
顶体反应;
外源基因整合与表达;
小鼠; |
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【英文关键词】 |
sperm-mediated gene transfer;
concentrations of DNA;
acrosome reaction;
exogenous genes integration and expression;
mouse; |
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【摘要】 |
【目的】精子介导的转基因技术简单易行,其作为制备转基因动物的一种方法已经被很多科学家所认同。但是不同实验室的研究结果显示其稳定性和重复性较低,转基因效率差异极大。现将主要探讨导致这种现象的原因。【方法】小鼠精子获能后分别与0、15、30和300nmol·L-1的Cy-3标记DNA(Cy-3-DNA)在37℃共孵育30 min。其后,血细胞计数板检测小鼠精子的活率;共孵育精子进行直接涂片,DPBS洗涤后涂片,DnaseI消化后涂片,精子涂片置于荧光显微镜下,记录视野中的精子总数及显示Cy-3信号的精子数,用于统计精子结合及内化DNA的效率。精子与300 nmol·L-1的Cy-3-DNA共孵育后,以50μmol·L-1的P4诱导精子顶体反应,统计顶体反应前后显示Cy-3信号的精子比例。精子分别与15和300 nmol·L-1 Cy-3-DNA共孵育后,精子进行体外受精,在荧光镜下观察合子期受精卵中Cy-3-DNA的存在位置。按照优化后的条件,精子分别与0、15和300 nmol·L-1 pEGFP-C1质粒共孵育后进行体外受精,制备转基因胚胎。比较试验组和对照组的受精率和发育效率,采用PCR和RT-PCR方法检... |
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【英文摘要】 |
【Objective】 Sperm-mediated gene transfer technique is simple, it has been recognized by many scientists as a way to produce transgenic animals, however, the results from different laboratories showed poor stability and reproducibility, transgenic efficiency is also significantly different. The aim of this study is to clarify the main factors causing this phenomenon.【Method】Capacitated sperms were incubated with 0, 15, 30 and 300 nmol·L-1 Cy-3 labeled DNA(Cy-3-DNA)at 37 ℃for 30 min. After incubation, sperms ... |
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【基金】 |
国家自然科学基金(31101033) |
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【更新日期】 |
2014-11-18 |
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【分类号】 |
Q78 |
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【正文快照】 |
Research on Key Factors Restricting Efficiency ofSperm-Mediated Gene TransferJIAO Ming-xia,MU Yan-shuang,BOU Gerelchimeg,ZHANG Lin-lin,KONG Qing-ran,FU Hai-peng,LIU Zhong-hua(College of Life Science,Northeast Agricultural University,Haerbin150030)0引言【? |
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