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pEGFP-C2-hTim-3真核表达载体的构建和hTim-3质粒稳定转染16HBE细胞株的建立  
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【英文篇名】 Construction of a eukaryotic expression vector,pEGFP-C2-hTim-3,and establishment of a 16HBE cell line stably transfected with a plasmid containing human Tim-3
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【作者】 刘嵘; 李一荣; 胡丽华;
【英文作者】 LIU Rong; LI Yi-rong; HU Li-hua; Department of Pathogen Biology; Medical College; Yangtze University; Clinical Laboratory; Tongji Hospital affiliated with Tongji Medical College; Huazhong University of Science & Technology;
【作者单位】 长江大学医学院病原生物学部; 华中科技大学同济医学院附属协和医院检验科;
【文献出处】 中国病原生物学杂志 , Journal of Pathogen Biology, 编辑部邮箱 2014年 10期  
期刊荣誉：中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 16HBE; hTim-3; PCR; 克隆; 转染; 筛选;
【英文关键词】 16HBE; hTim-3; PCR; clone; transfection; screening;
【摘要】 目的筛选表达Tim-3的人呼吸道相关细胞株,为进一步阐明Tim-3可能与人呼吸道疾病相关奠定基础;构建pEGFP-C2-hTim-3真核表达载体,以期用于hTim-3的功能研究。将测序正确的重组质粒pEGFP-C2-hTim-3转染入人支气管上皮细胞株16HBE中,筛选出阳性细胞克隆,为后续实验提供理论基础。方法用含10%胎牛血清的高糖DMEM培养基于37℃5%CO2饱和湿度培养箱中体外培养人呼吸道相关细胞株16HBE、A549和GLC-82,调整细胞到最佳状态,对数生长期时收集细胞,抽提总RNA,逆转录为cDNA。参照人GenBank中Tim-3基因的全长序列,使用Primer5.0设计并合成其引物,采用PCR检测以上3种细胞Tim-3的mRNA。将健康人外周血Tim-3基因全长cDNA片段克隆入真核表达载体pEGFP-C2,经菌落PCR、双酶切及测序鉴定,构建包含目的基因Tim-3的重组质粒pEGFPC2-hTim-3。利用脂质体介导pEGFP-C2-hTim-3质粒和pEGFP-C2质粒分别转染16HBE细胞,荧光显微镜下观察16HBE细胞的瞬时转染效率,并采用含G418的培养基筛选以获得整合pEGFP...
【英文摘要】 Objectives To screen cell lines derived from the human respiratory tract for expression of Tim-3in order to lay the foundation for elucidation of the potential association between Tim-3and respiratory tract diseases;to construct a eukaryotic expression vector,pEGFP-C2-hTim-3,for further study of the function of human Tim-3(hTim-3);and to transfect pEGFP-C2-hTim-3and pEGFP-C2 into 16HBE cells and screen for positive clones in order to facilitate further study. Methods The human bronchial epithelial cell line...
【更新日期】 2014-12-30
【分类号】 R56
【正文快照】 支气管变应性哮喘是一种常见的多发疾病,其发病受自身免疫状态、遗传、环境等多种因素的共同影响。研究表明Th1/Th2细胞及其分泌的细胞因子的比例失衡是导致其发病的核心因素。人体在正常状态下,Th1细胞和Th2细胞受不同的转录因子调控,分泌不同的细胞因子,相互制衡,共同维持人?

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