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利用可重复使用的URA3标记基因建立热带假丝酵母基因敲除系统  
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【英文篇名】 Development of a genetic transformation system for Candida tropicalis based on a reusable selection marker of URA3 gene
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【作者】 项峥; 陈献忠; 张利华; 沈微; 樊游; 陆茂林;
【英文作者】 Zheng Xiang; Xianzhong Chen; Lihua Zhang; Wei Shen; You Fan; Maolin Lu; Key Lab of Industrial Biotechnology; Education Ministry; School of Biotechnology; Jiangnan University; Jiangsu Institute of Microbiology Co. Ltd.;
【作者单位】 江南大学生物工程学院; 工业生物技术教育部重点实验室; 江苏省微生物研究所有限责任公司;
【文献出处】 遗传 , Hereditas, 编辑部邮箱 2014年 10期  
期刊荣誉：中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 热带假丝酵母; 遗传转化; 同源重组; URA3基因; 基因敲除;
【英文关键词】 Candida tropicalis; genetic transformation; homologous recombination; URA3 gene; gene disruption;
【摘要】 热带假丝酵母(Candida tropicalis)在发酵工业中具有重要的应用潜力,但二倍体遗传结构和较低的遗传转化效率限制了其代谢工程育种技术的应用。建立可靠的遗传转化技术并高效的删除目的基因是代谢工程改造热带假丝酵母的重要前提。文章以C.tropicalis ATCC 20336为出发菌株,通过化学诱变筛选获得了尿嘧啶缺陷型突变株C.tropicalis XZX(ura3/ura3)。以丙酮酸脱羧酶(Pyruvate decarboxylase,PDC)基因作为靶基因构建了两端包含同源臂并在选择性标记C.tropicalis URA3(Orotidine-5′-phosphate decarboxylase,乳清酸核苷-5-磷酸脱羧酶)基因两侧同向插入源于沙门氏菌(Salmonella typhimurium)的hisG序列的基因敲除盒PDC1-hisG-URA3-hisGPDC1(PHUHP),并转化宿主菌株C.tropicalis XZX,筛选获得PHUHP片段正确整合到染色体的PDC基因位点的转化子XZX02。在此基础上,将转化子XZX02涂布于5-FOA(5-氟乳清酸)选择培养基上,筛选得到URA...
【英文摘要】 Candida tropicalis, a diploid asporogenic yeast, is frequently utilized in industrial applications and research studies. However, the low efficiency of genetic transformation limits the strain improvement by metabolic engineering. A reliable transformation and efficient deletion of target gene are prerequisite for molecular improvement of C. tropicalis. In this study, an efficient approach for genetic transformation of C. tropicalis was developed based on the URA3 gene as a reusable selection marker and bot...
【基金】 江苏省科技支撑计划项目(编号:BE2012618)资助
【更新日期】 2014-11-18
【分类号】 Q78
【正文快照】 热带假丝酵母(Candida tropicalis)是一种二倍体酵母,在发酵工业中有着广泛的应用。作为一种重要的工业微生物,热带假丝酵母胞内高效的β-氧化途径赋予其能够利用烷烃和脂肪酸作为唯一碳源,合成长链二元酸。目前,利用热带假丝酵母发酵法生产长链二元酸已应用于工业生产中[1]。?

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