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重组质粒pEGFP-N2-Wnt3a的构建和鉴定  
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【英文篇名】 Construction and identification of recombinant plasmid pEGFP-N2-Wnt3a
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【作者】 刘亦恒; 张寿; 吴多庆; 曾志谋; 黄重; 张海英;
【英文作者】 LIU Yi-heng; ZHANG Shou; WU Duo-qing; ZENG Zhi-mou; HUANG Zhong; ZHANG Hai-ying; Department of Orthopaedics; Haikou Municipal People's Hospital;
【作者单位】 海口市人民医院骨科中心; 海南医学院人体解剖学教研室;
【文献出处】 现代预防医学 , Modern Preventive Medicine, 编辑部邮箱 2014年 11期  
期刊荣誉:中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 Wnt3a基因; pEGFP-N2真核表达载体; 脊髓损伤;
【英文关键词】 Wnt3a gene; pEGFP-N2 eukaryotic expression vector; Spinal cord injure;
【摘要】 目的构建大鼠Wnt3a真核表达重组质粒。方法从大鼠脊髓中提取总RNA,利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法扩增编码大鼠Wnt3a的基因片段,应用基因重组技术将大鼠Wnt3a基因片段克隆到真核表达载体pEGFP-N2中,经XhoI及EcoRⅠ双酶切和单酶切证实所构建的载体。结果 RT-PCR方法获得大鼠Wnt3a的基因片段,限制性内切酶酶切分析和PCR法鉴定表明为正确重组质粒。结论构建的真核表达重组质粒pEGFP-N2-Wnt3a经过鉴定,结构正确,为进一步转染骨髓基质干细胞(BMSCs)和脊髓损伤(SCI)治疗提供研究基础。
【英文摘要】 Objective To construct recombinant eukaryotic expression plasmid named pEGFP-N2-Wnt3a. Methods Total RNA was extracted from SD Rat's spinal cord and the Wnt3a gene was amplified by reverse transcription-polymerase chain reaction(RT-PCR). By using gene recombination technique, Rat Wnt3a cDNA was inserted into retroviral vector pEGFP-N2. The recombinant plasmid was identified by a pair of specified primers containing the restriction sites of XhoI and EcoRⅠ. Results The Wnt3a gene was obtained by RT-PCR, the r...
【基金】 国家自然科学基金(81100246); 海南省自然基金资助(811204); 海口市重点科技项目(2011-0135)
【更新日期】 2014-10-21
【分类号】 R346
【正文快照】 脊髓损伤(Spinal Cord Injure,SCI)后运动和感觉功能的缺失主要是损伤后大量神经元死亡、神经元再生困难所导致。近年来大量实验研究表明,利用药物、细胞移植等手段虽然使脊髓损伤修复取得了一定的进展,但其效果距临床应用还相差甚远[1~3]。骨髓间充质干细胞(Bone Mesenchymal

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