节点文献
小鼠抗人前B细胞白血病同源盒基因3多克隆抗体的制备与鉴定
【摘要】 目的制备前B细胞白血病同源盒基因3(PBX3)多克隆抗体。方法采用反转录PCR扩增PBX3基因区序列,并重组入原核表达载体pGEX-4T-1,重组载体转化BL21大肠杆菌,异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导GST-PBX3融合蛋白的表达。SDS-PAGE纯化融合蛋白,并用GST-PBX3融合蛋白免疫BALB/c小鼠,收集经过免疫的小鼠血清即抗PBX3的多克隆抗血清,采用间接ELISA检测其效价,通过免疫细胞化学技术及Western blot法鉴定其特异性。结果成功构建pGEX-4T-1/PBX3原核表达载体,转化BL21菌株后可高效表达GST-PBX3融合蛋白,且以不可溶包涵体形式存在。SDS-PAGE纯化蛋白并免疫小鼠产生的抗PBX3血清可特异识别细胞外源过表达的PBX3蛋白,同时可检测到细胞外源性PBX3蛋白的细胞内定位情况。结论获得效价和特异性良好的PBX3多克隆抗体。
【关键词】 前B细胞白血病同源盒基因3；
融合蛋白表达；
多克隆抗体；
【基金】 国家自然科学基金(81201964,81372594,81301874,81330051);北京市自然科学基金(5122012,7132051)
- 【文献出处】 细胞与分子免疫学杂志 ,Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology , 编辑部邮箱 ,2014年11期
- 【分类号】R392.11;R392-33
- 【被引频次】1
- 【下载频次】106