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G250抗原肽与HBcAg融合基因原核表达载体的构建及表达蛋白的免疫分析  
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【英文篇名】 Construction and prokaryotic expression of recombinant gene G250 antigenic peptide-HBcAg and the immunogenicity analysis of the fusion protein
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【作者】 刘波; 孙泽强; 刘庆勇; 陈杰; 王司军; 杨广笑; 王全颖;
【英文作者】 LIU Bo; SUN Ze-qiang; LIU Qing-yong; CHEN Jie; WANG Si-jun; YANG Guang-xiao; WANG Quan-ying; School of Medicine of Shandong University; Department of Urinary Surgery; Ji'nan Central Hospital Affiliated to Shandong University; Xi'an Huaguang Biological Engineering Co.Ltd.;
【作者单位】 山东大学医学院; 山东大学附属济南市中心医院泌尿外科; 西安华广生物工程公司;
【文献出处】 西安交通大学学报(医学版) , Journal of Xi'an Jiaotong University(Medical Sciences), 编辑部邮箱 2014年 01期  
期刊荣誉：中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  中国期刊方阵  CJFD收录刊
【中文关键词】 融合蛋白; G250; HBcAg; 免疫原性; 肾癌;
【英文关键词】 fusion protein; G250; HBcAg; immunogenicity; renal carcinoma;
【摘要】 目的构建肾癌G250抗原肽与HBcAg重组基因的原核表达质粒pET28a(+)/C-G250肽-C,并通过大肠杆菌进行原核表达并纯化,分析表达融合蛋白的免疫原性及抗原性。方法 PCR扩增编码G250抗原中249～268氨基酸的基因片段,将G250肽插入去除主要免疫优势区的重组质粒pGEMEX/HBcAg中,获得重组质粒pGEMEX/C-G250肽-C,为更换酶切位点,以pGEMEX/C-G250肽-C为模板,PCR扩增C-G250肽-C基因片段,最终将目的基因亚克隆入原核表达质粒pET28a(+)中,IPTG诱导融合蛋白表达,利用Ni 2+-NTA亲和层析法纯化重组融合蛋白,SDSPAGE鉴定融合蛋白的表达,纯化后融合蛋白经腹腔注射免疫BALB/c小鼠,间接ELISA法检测小鼠血清中抗体的滴度。结果酶切及基因测序鉴定证实融合基因正确重组于表达质粒pET28a(+)中,原核表达并纯化后,该分离纯化融合蛋白纯度达95%以上,其相对分子质量约为22.35。BALB/c小鼠经4次免疫后,所有小鼠血清中均可检测到抗体,免疫第6周其血清中抗体滴度可达到1∶5.12×105,抗G250肽抗体滴度达到1∶6.4×104,抗H...
【英文摘要】 Objective To construct the G250 antigen peptide and HBcAg recombinant gene prokaryotic expression plasmid pET28a(+)/C-G250 peptide-C and analyze the immunogenicity of the fusion protein expressed in E.coli BL21(DE3).Methods The gene fragments of encoding G250 antigenic peptide/249-268 were amplified by PCR,the G250 peptide was inserted to remove the major immunodominant region of the recombinant plasmid pGEMEX/HBcAg to obtain the recombinant plasmid pGEMEX/C-G250 peptide-C.For the replacement of the enzyme ...
【基金】 山东省自然科学基金资助项目(No.Y2006C04)~~
【更新日期】 2014-04-24
【分类号】 R737.11
【正文快照】 肾癌是一种免疫原性很强的肿瘤,生物免疫治疗对其有良好的治疗效应,疫苗研究成为目前肾癌免疫治疗的热点之一[1]。G250抗原是碳酸酐酶家族成员之一,它与具有碳酸酐酶活性的细胞黏附因子:碳酸酐酶IX(MN/CA IX)的基因结构完全相同,因此也称为CA IX(简称G250)[2],其在肾癌组织中高

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