抗人肿瘤坏死因子-α人源单克隆抗体在CHO细胞中的表达及鉴定-中国学术期刊网络出版总库

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抗人肿瘤坏死因子-α人源单克隆抗体在CHO细胞中的表达及鉴定

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【英文篇名】	Expression of human monoclonal antibody against human tumor necrosis factor-α in CHO cells and identification of expressed product
【下载频次】	★★★★★
【作者】	崔文禹; 李计来; 凌媛; 李树香; 刘敬; 王欣怡; 徐静; 张云涛;
【英文作者】	CUI Wen-yu; LI Ji-lai; LING Yuan; LI Shu-xiang; LIU Jing; WANG Xin-yi; XU Jing; ZHANG Yun-tao; National Vaccine & Serum Institute;
【作者单位】	北京生物制品研究所有限责任公司第三研究室;
【文献出处】	中国生物制品学杂志 , Chinese Journal of Biologicals, 编辑部邮箱 2014年 12期期刊荣誉：ASPT来源刊 CJFD收录刊
【中文关键词】	肿瘤坏死因子-α; 单克隆抗体; CHO细胞;
【英文关键词】	Tumor necrosis factor(TNF)-α; Monoclonal antibody; CHO cells;
【摘要】	目的在CHO细胞中表达抗人肿瘤坏死因子(human tumor necrosis factor-alpha,h TNF-α)人源单克隆抗体,并对抗体纯化后进行鉴定。方法将含有编码抗h TNF-α人源单克隆抗体轻、重链可变区及恒定区基因的真核表达质粒p HL,利用脂质体Lipofectamine TM 2000转染CHODG44细胞,经氨甲喋呤(methotrexate,MTX)加压筛选和单克隆筛选,获得分泌表达抗h TNF-α人源单克隆抗体的CHO细胞株。应用Mab Select Su Re和Capto adhere两步层析纯化抗体后,分析抗体的纯度、N-末端序列、结合动力学平衡常数及中和活性。结果经两步层析后,抗h TNF-α人源单抗经SDS-PAGE分析,可见纯度较好的抗体重链、轻链和完整抗体条带,SEC-HPLC纯度为98.79%;抗体的轻、重链N-末端氨基酸序列与预期一致,其结合动力学平衡常数(KD)为1.34×10-10 M,能拮抗TNF-α对L929细胞的杀伤作用,对TNF-α细胞毒的中和率达90%左右。结论在CHO细胞中成功表达了具有较好中和活性的抗h TNF-α人源单克隆抗体。
【英文摘要】	Objective To express the human monoclonal antibody against human tumor necrosis factor(h TNF)-α in CHO cells,then purify and identify the expressed product. Methods Plasmid p HL containing the genes encoding the variable and constant regions of light and heavy chains of human monoclonal antibody against h TNF-α was transfected to CHODG44 cells in mediation of LipofectamineTM2000,based on which the cell strain for secretory expression of monoclonal antibody against h TNF-α was screened by methotrexate(MTX)pr...
【更新日期】	2015-02-23
【分类号】	R392
【正文快照】	目前,治疗性单克隆抗体药物在全球的年销售额已超过促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)类药物,正在进行临床试验的抗体药物有240余种[1],已在人类十多种重大顽疾中得到广泛应用,临床效果肯定。肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)是与类风湿性关节炎(rheumat

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