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包被伤寒Vi多糖抗原检测鼠血清中伤寒沙门菌抗体的间接ELISA方法的建立  
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【英文篇名】 Development of an indirect ELISA method for detection of Salmonella typhi antibody in mouse serum using typhoid Vi polysaccharide as coating antigen
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【作者】 吴凯; 樊会兰; 赵志宏; 白梅; 陈磊; 周燕美; 包南艳; 郭秋岑; 钱红兵; 李生迪;
【英文作者】 WU Kai; FAN Hui-lan; ZHAO Zhi-hong; BAI Mei; CHEN Lei; ZHOU Yan-mei; BAO Nan-yan; GUO Qiu-cen; QIAN Hong-bing; LI Sheng-di; Walvax Biotechnology Co. Ltd;
【作者单位】 云南沃森生物技术股份有限公司;
【文献出处】 中国生物制品学杂志 , Chinese Journal of Biologicals, 编辑部邮箱 2014年 08期  
期刊荣誉：ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 伤寒沙门菌; 荚膜多糖; 间接酶联免疫吸附试验;
【英文关键词】 Salmonella typhi; Capsular polysaccharide; Indirect enzyme-linked immunosorbent assay;
【摘要】 目的建立检测伤寒沙门菌(Salmonella typhi)抗体的间接ELISA方法,并进行验证。方法对常规间接ELISA方法进行优化,确定抗原最适包被质量浓度及被检血清最佳稀释度、最适包被温度及时间、包被抗原与血清的最适温度和时间、血清与酶标二抗及封闭的最适温度和时间、酶标二抗最适工作质量浓度,并验证该方法的灵敏度、精密性、特异性及耐用性;用伤寒Vi多糖结合物原液和伤寒Vi多糖衍生物经小鼠大腿内侧皮下免疫,分别于免疫后第14、21、28、35天,经眼眶采全血,分离血清,应用建立的间接ELISA方法检测抗体水平,计算抗体几何平均滴度(GMT)。结果确定了间接ELISA方法最适工作条件:伤寒Vi荚膜多糖抗原最适包被质量浓度为5μg/ml,血清最佳稀释倍数为1∶40;最适包被温度及时间为4℃12 h;包被抗原与血清最适反应温度和时间为37℃2 h;血清与酶标二抗最适反应温度和时间为37℃1 h;封闭液最适封闭温度和时间为室温1 h;HRP标记的羊抗鼠IgG最佳反应浓度为1∶8 000。该方法灵敏度为1∶1 600;孔间和板间CV平均值分别为2.8%和5.8%;与其他血清无交叉反应;pH值、包被时间、包被温度及酶结合...
【英文摘要】 Objective To develop an indirect ELISA method for detection of Salmonella typhi antibody. Methods The condition for routine indirect ELISA,including antigen concentration for coating,dilution of serum to be tested,temperatures and times for coating,for reactions of coating antigen with serum and serum with enzyme-labeled secondary antibody and for blocking,as well as working mass concentration for enzyme-labeled secondary antibody,were optimized. The developed method was verified for sensitivity,precision,s...
【基金】 云南省科技计划项目(2014BC003)
【更新日期】 2014-10-08
【分类号】 R392-33;R378.22
【正文快照】 伤寒是由肠道沙门菌伤寒杆菌引起的以发热为主要表现的一种急性肠道传染病,是一种全球性的公共卫生问题。目前全球每年约有2 200万感染者,导致约22万的死亡病例[1]。伤寒沙门菌(Sal-monella typhi)是一种有强致病力的细菌,半数感染量为105个细菌[2]。20世纪40年代抗生素的出现,

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