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肺炎链球菌热休克蛋白ClpE多克隆抗体的制备及其亚细胞定位  
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【英文篇名】 Preparation of polyclonal antibody and subcellular location of heat shock protein ClpE of Streptococcus pneumoniae
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【作者】 蔡莺莺; 闫文娟; 张群; 王虹; 胥文春; 何於娟; 尹一兵; 张雪梅;
【英文作者】 CAI Ying-ying; YAN Wen-juan; ZHANG Qun; WANG Hong; XU Wen-chun; HE Yu-juan; YIN Yi-bing; ZHANG Xue-mei; Key Laboratory of Medical Diagnostics; Ministry of Education; Department of Laboratory Medicine; Chongqing Medical University;
【作者单位】 重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室; 重庆医科大学附属儿童医院检验科;
【文献出处】 中国生物制品学杂志 , Chinese Journal of Biologicals, 编辑部邮箱 2014年 01期  
期刊荣誉：ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 肺炎链球菌; 热休克蛋白; ClpE; 亚细胞定位;
【英文关键词】 Streptococcus pneumoniae; Heat shock protein(HSP); ClpE; Subcellular location;
【摘要】 目的制备肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)热休克蛋白(heat shock protein,HSP)ClpE多克隆抗体,并确定ClpE在S.pn表面的亚细胞定位。方法应用PCR法从S.pn D39中扩增clpE基因全长片段,克隆入原核表达载体pET28a,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,经亲和层析纯化重组蛋白。用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,间接ELISA法测定抗体效价,Western blot法鉴定抗体的特异性。ELISA法分析ClpE在S.pn表面的亚细胞定位。结果重组表达质粒经PCR、双酶切和测序证实构建正确;表达的重组ClpE蛋白相对分子质量约83 000,表达量约占全菌总蛋白的60%,主要以可溶性上清形式存在;纯化的重组蛋白纯度达90%;制备的ClpE多克隆抗体效价达1∶4 096 000,可与S.pn D39全菌发生特异性反应,S.pn D39在正常生长时可表达ClpE蛋白;ClpE在S.pn表面有表达。结论成功制备了高效价和特异性的ClpE多克隆抗体,ClpE在S.pn表面可正常表达,为表面蛋白。
【英文摘要】 Objective To prepare the polyclonal antibody against heat shock protein ClpE of Streptococcus pneumoniae(S. pn),and determine its subcellular location in S. pn. Methods Full length ClpE gene of S. pn D39 was amplified by PCR and cloned into prokaryotic expression vector pET28a. The constructed recombinant plasmid pET28a::ClpE was transformed to E. coli BL21(DE3)and induced by IPTG. The expressed product was purified by affinity chromatography, with which BALB / c mice were immunized. The prepared polyclonal...
【基金】 国家自然科学基金(81000766)
【更新日期】 2014-02-21
【分类号】 R378.14
【正文快照】 肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)是一种常见的革兰阳性条件致病菌,可引起肺炎、脑膜炎和败血症等疾病,全球每年有300万~500万人死于该病原菌引起的疾病[1]。HSP100/Clp ATPase是一类高度保守并广泛存在于多种病原菌中的热休克蛋白(heat shock protein,HSP),在致病中

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