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同源重组敲除临床肺炎克雷伯菌质粒bla_(KPC-2)基因  
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【英文篇名】 Homologous recombination knockout bla_(KPC-2) gene in clinical isolates of Klebsiella pneumonia
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【作者】 仉英; 田月如; 艾芙琪; 刘红; 马逸珉; 王蓓; 蒋晓飞;
【英文作者】 ZHANG Ying; TIAN Yueru; AI Fuqi; LIU Hong; MA Yimin; WANG Bei; JIANG Xiaofei; Department of Clinical Laboratory; Huashan Hospital; Fudan University;
【作者单位】 复旦大学附属华山医院检验科;
【文献出处】 检验医学 , Laboratory Medicine, 编辑部邮箱 2014年 06期  
期刊荣誉：ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 基因敲除; 同源重组; 肺炎克雷伯菌;
【英文关键词】 Gene knockout; Homologous recombination; Klebsiella pneumonia;
【摘要】 目的建立敲除临床肺炎克雷伯菌耐药菌株质粒上的耐药基因的方法。方法聚合酶链反应(PCR)分别扩增试验菌株待敲除目的基因blaKPC-2的上下游片段及质粒pMQ300的潮霉素耐药基因片段,采用重叠延伸基因扩增(SOE-PCR)技术构建融合片段,以耐阿普霉素的λred质粒pKOBEG-Apr为介导,同源重组敲除临床肺炎克雷伯菌耐药菌株的blaKPC-2基因。用含潮霉素和阿普霉素的LB培养基筛选重组子,用PCR和逆转录PCR扩增检测blaKPC-2基因、潮霉素耐药基因及药物敏感性验证重组子。结果不同多位点序列分析(MLST)型别的2株临床肺炎克雷伯菌耐药菌株的blaKPC-2基因得以敲除。结论λred同源重组法可以可靠敲除临床肺炎克雷伯菌耐药菌株质粒上的基因。
【英文摘要】 Objective To establish a method of knocking out drug-resistant genes on plasmid contained by clinical Klebsiella pneumonia drug-resistant isolates. Methods Polymerase chain reaction( PCR) was used to amplify the upstream and downstream fragments of target gene blaKPC-2of the test isolates and hygromycin resistance gene fragments on plasmid pMQ300,respectively. Gene splicing by overlap extension polymerase chain reaction( SOE-PCR) was used to construct the fusion fragments,and apramycin resistance lambda red...
【更新日期】 2014-08-18
【分类号】 R446.5
【正文快照】 由于抗菌药物的滥用,导致临床菌株的耐药性不断增强。最主要的耐药机制是通过质粒或其它可移动原件获取并不断积累各种耐药基因,导致同一菌株携带多种耐药基因而产生多重耐药、泛耐药。我们研究小组通过研究2006年8月至2009年12月共57株泛耐药临床肺炎克雷伯菌株,发现其主要为2

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