乳腺生物反应器表达的重组人抗凝血酶Ⅲ的分离纯化-中国学术期刊网络出版总库

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乳腺生物反应器表达的重组人抗凝血酶Ⅲ的分离纯化

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【英文篇名】	Purification of recombinant human antithrombin Ⅲ expressed in a goat mammary bioreactor
【下载频次】	★★★★★
【作者】	王翠杰; 黄永东; 孔英俊; 罗坚; 张贵锋; 赵东旭; 苏志国; 马光辉;
【英文作者】	Cuijie Wang; Yongdong Huang; Yingjun Kong; Jian Luo; Guifeng Zhang; Dongxu Zhao; Zhiguo Su; Guanghui Ma; School of Life Science and Technology; Beijing Institute of Technology; National Key Laboratory of Biochemical Engineering; Institute of Process Engineering; Chinese Academy of Sciences;
【作者单位】	北京理工大学生命学院; 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室;
【文献出处】	生物工程学报 , Chinese Journal of Biotechnology, 编辑部邮箱 2014年 10期期刊荣誉：中文核心期刊要目总览 ASPT来源刊 CJFD收录刊
【中文关键词】	乳腺生物反应器; 重组人抗凝血酶Ⅲ; 肝素亲和层析; 分离纯化;
【英文关键词】	mammary gland bioreactor; reconstruction human antithrombin Ⅲ; heparin affinity chromatography; purification;
【摘要】	抗凝血酶Ⅲ(AT Ⅲ)是人体内最重要的抗凝血物质,利用转基因技术生产重组人抗凝血酶Ⅲ(rhAT Ⅲ)受到了越来越多的关注,如何有效地将rhAT Ⅲ从转基因羊奶中分离纯化出来是实现其产业化的关键所在。本研究建立了基于等电点沉淀和肝素亲和层析的纯化工艺,实现了rhAT Ⅲ的高效、快速纯化。先用等电点沉淀法,快速去除了占总蛋白50%左右的酪蛋白;然后用肝素亲和层析纯化rhAT Ⅲ,并系统考察了pH值和温度对rhAT Ⅲ稳定性的影响,以及pH值和操作条件(洗脱梯度、流速和上样量)对rhAT Ⅲ分离效果的影响。在优化的条件下,rhAT Ⅲ纯度达到99%以上,蛋白收率达到90%,活性收率约为50%。所建立的纯化工艺简单、快速,rhAT Ⅲ收率高,为今后工艺放大提供了重要的依据和参考。
【英文摘要】	Antithrombin III(AT Ⅲ) is the most important anti-clotting substance. Recombinant human antithrombin Ⅲ(rhAT Ⅲ) expressed in transgenic goat milk attracts more and more attention. Develop an effective purification route for rhAT Ⅲis vital to its industrial production. An efficient purification method was developed for the rapid purification of rhAT Ⅲ by isoelectric precipitation and heparin affinity chromatography. First, casein was effectively removed by isoelectric precipitation. rhAT Ⅲ was further purifie...
【基金】	国家自然科学基金(Nos.20906094,21306206); 江苏省自然科学基金(No.BK2011342)资助~~
【更新日期】	2014-11-13
【分类号】	Q814.1
【正文快照】	抗凝血酶Ⅲ(AntithrombinⅢ,ATⅢ)是血浆中最重要的一个抗凝血酶因子[1],在维持血液的凝血与抗凝血平衡中起重要作用[2]。ATⅢ的分子量为58-64 kDa,等电点为5.1。目前,ATⅢ有3种来源,从血浆中纯化[3]、用基因工程细胞生产[4]和用乳腺生物反应器生产[5-6]。乳腺生物反应器能够生

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