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一个有利于细胞色素P450BM-3催化吲哚合成靛蓝的三位点突变酶:D168L/E435T/V445A  
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【英文篇名】 A triple mutant improving activity of cytochrome P450 BM-3 to catalyze indole hydroxylation:D168L/E435T/V445A
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【作者】 张彭湃; 胡升; 梅乐和; 雷引林; 金志华; 姚善泾;
【英文作者】 ZHANG Pengpai; HU Sheng; MEI Lehe; LEI Yinlin; JIN Zhihua; YAO Shanjing; Institute of Bioengineering; Zhejiang University; School of Biological and Chemical Engineering; Ningbo Institute of Technology;
【作者单位】 浙江大学生物工程研究所; 浙江大学宁波理工学院生物与化学工程学院;
【文献出处】 化工学报 , CIESC Journal, 编辑部邮箱 2014年 04期  
期刊荣誉：中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  中国期刊方阵  CJFD收录刊
【中文关键词】 生物催化; 酶; 分子生物学; P450 BM-3; 吲哚; 羟基化; 靛蓝;
【英文关键词】 bio-catalysis; enzyme; molecular biology; P450 BM-3; indole; hydroxylation; indigo;
【摘要】 为进一步提高P450 BM-3催化吲哚合成靛蓝的能力,在前期获得的突变酶D168L/E435T基础上引入V445A突变,获得突变酶D168L/E435T/V445A,该突变酶与D168L/E435T及V445A相比,对吲哚的亲和力分别降低41.5%及35.8%,转化数(kcat)分别提高1.61倍及1.31倍,催化效率(kcatKm-1)分别提高1.53倍及1.47倍;该突变酶对电子的耦合率也提高至24.7%,较D168L/E435T提高39.5%,较V445A提高64.7%,说明该突变酶在电子的利用率上有明显改善;此外,该突变酶催化副产物靛玉红的比例大幅降低,降低为D168L/E435T的41.7%及V445A的30.6%,说明该突变酶催化吲哚的区域选择性上也更加有利于靛蓝形成。
【英文摘要】 To further enhance hydroxylation ability with indole of P450 BM-3,site-directed mutagenesis with V445A was introduced to the mutant D168L/E435T obtained in earlier research,and mutant D168L/E435T/ V445A was obtained.Compared with D168L/E435T and V445A,mutant D168L/E435T/V445A exhibited lower affinity with indole,but higher improved turnover rate(kcat).Correspondingly,catalytic efficiency(kcatKm -1) was increased to 1.53 times and 1.47 times respectively.The electronic coupling rate of the mutant was also im...
【基金】 国家自然科学基金项目(21176220,31240054); 浙江省自然科学基金重点项目(Z13B060008); 宁波市重大科技项目(2011C11023)~~
【更新日期】 2014-06-27
【分类号】 TQ611
【正文快照】 引言靛蓝(indigo)是人类所知最古老的天然色素之一,广泛应用于织物染色、食用色素以及医药工业[1]。在医药工业中,靛蓝及其同分异构体靛玉红是传统中药板蓝根、大青叶及青黛的主要活性成分,能有效应对流行性感冒[2],靛蓝的其他衍生物,如靛蓝酮具有保护肝脏功能[3],二溴靛蓝则具

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