A型口蹄疫病毒真核表达载体的构建及其在BHK-21细胞中的表达

【摘要】 为了构建A型口蹄疫重组表达质粒,并鉴定其在BHK-21细胞中的表达效果及免疫活性,通过设计引物及酶切位点,获得A型口蹄疫毒株AF/72的P1,2A及3C编码区的目的基因片段,利用设计的BamHⅠ及XbaⅠ酶切位点,定向将片段克隆于真核表达载体pcDNA3.1(+),经筛选、鉴定及序列分析后,将重组阳性质粒pcDNA3.1/P12A3C转染BHK-21细胞,通过双抗体夹心ELISA方法、间接免疫荧光标记方法及电镜透射法,检测细胞中表达的蛋白。结果表明:目的片段正确克隆到pcDNA3.1真核表达载体上,转染BHK-21细胞后,几种方法都能够检测表达蛋白。由此得出结论,构建的A型pcDNA3.1/P12A3C重组质粒能够在BHK-21细胞中正确表达目的蛋白并能组装成病毒空衣壳,表达蛋白具有良好的免疫活性,为进一步研究该质粒的动物免疫试验奠定了基础。更多还原