葡萄溃疡病菌限制性内切酶介导整合方法的建立及转化子库的构建-中国学术期刊网络出版总库

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葡萄溃疡病菌限制性内切酶介导整合方法的建立及转化子库的构建

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【英文篇名】	Establishment of restriction enzyme mediated integration and construction of transformants library in Lasiodiplodia theobromae
【下载频次】	★★★★★
【作者】	张鑫; 刘爱芬; 张玮; 严红; 乔广行; 燕继晔; 李兴红;
【英文作者】	ZHANG Xin1 LIU Ai-Fen1; 2 ZHANG Wei1 YAN Hong1 QIAO Guang-Hang1 YAN Ji-Ye1 LI Xing-Hong1(1.Institute of Plant and Environment Protection; Beijing Academy of Agriculture and Forestry Science; Beijing 100097; China)(2.College of Agronomy and Plant Protection; Qingdao Agricultural University; Qingdao; Shandong 266109; China);
【作者单位】	北京市农林科学院植物保护环境保护研究所; 青岛农业大学农学与植物保护学院;
【文献出处】	微生物学通报 , Microbiology China, 编辑部邮箱 2013年 07期期刊荣誉：中文核心期刊要目总览 ASPT来源刊中国期刊方阵 CJFD收录刊
【中文关键词】	葡萄溃疡病菌; 原生质体制备; REMI;
【英文关键词】	L.theobromae; Protoplasts preparation; REMI;
【摘要】	【目的】摸索葡萄溃疡病菌(Lasiodiplodia theobromae)限制性内切酶介导整合(Restriction enzyme mediated integration,REMI)的转化方法,并构建CSS-01s(L.theobro-mae)的REMI转化子库。【方法】利用REMI转化方法,将线性化的含有潮霉素抗性基因(Hygromycin phosphotransferase gene,Hyg)的pUCATPH质粒转化CSS-01s菌株的原生质体;测定其对潮霉素B的敏感浓度,摸索不同酶解液和酶解时间对原生质体制备的影响,统计不同限制性内切酶酶量对转化效率的影响,以摸索出的最优条件构建CSS-01s菌株的REMI转化子库,采用Southern blot的方法验证转化子。【结果】首次建立了一套L.theobromae的REMI转化方法,经转化得到包含6 000余个转化子的L.theobromae CSS-01s转化子库,随机挑选的5个转化子经Southern blot分析,质粒均插入到了HindⅢ相应的酶切位点处。【结论】浓度为2%崩溃酶+2%蜗牛酶酶混合液、酶解4 h为原生质体获得的最优条件,每管转化...
【英文摘要】	[Objective] To establish the Restriction enzyme mediated integration(REMI) trans-formation system and a REMI transformants library of Lasiodiplodia theobromae.[Methods] REMI method was used to obtain transformants of L.theobromae.Linearized DNA of plasmid pUCATPH containing the hygromycin phosphotransferase gene(Hyg) was integrated into chro-mosomes of wild strain CSS-01s.Sensitive concentration of L.theobromae to hygromycin B was determined.Different enzymolysis systems and digest time on preparation of pr...
【基金】	国家葡萄产业技术体系专项资金资助项目(No.CARS-30); 北京市农林科学院植物保护环境保护研究所创新基金项目
【更新日期】	2013-07-30
【分类号】	S436.631.12
【正文快照】	近年来,葡萄溃疡病在世界各地广泛发生,在美国、法国等13个国家均造成了严重危害[1?3],给全球葡萄产业造成巨大经济损失。我国李兴红研究组于2010年首次报道了可可毛色二孢Lasiodiplodia theobromae能侵染葡萄引起葡萄溃疡病[4]。该病会导致葡萄掉粒、穗腐、枝干溃疡,甚至死树,

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