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猪白细胞介素-2基因的原核表达、纯化及其生物学活性  
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【英文篇名】 Prokaryotic expression,purification and bioactivity of porcine interleukin-2 gene
【下载频次】 ★★★
【作者】 李凤华; 朱战波; 江国托;
【英文作者】 LI Feng-hua; ZHU Zhan-bo; JIANG Guo-tuo; College of Animal Science and Technology; Heilongjiang Bayi Agricultural University;
【作者单位】 黑龙江八一农垦大学动物科技学院; 大连三仪动物药品有限公司;
【文献出处】 中国生物制品学杂志 , Chinese Journal of Biologicals, 编辑部邮箱 2013年 12期  
期刊荣誉:ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 白细胞介素-2; 原核细胞; 基因表达; 生物活性;
【英文关键词】 Interleukin-2(IL-2); Prokaryotic cells; Gene expression; Bioactivity;
【摘要】 目的原核表达、纯化猪白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2),并检测其生物学活性。方法以提取的猪外周血淋巴细胞基因组RNA为模板,PCR扩增猪IL-2基因,插入原核表达载体pBV220,构建重组表达质粒pBV220/IL-2。将重组表达质粒转化感受态大肠埃希菌DH5α,经含Amp的LB平板筛选后,将重组菌于LB培养液中培养,分别于不同培养时间进行活菌计数,绘制重组菌的生长曲线;42℃诱导表达重组蛋白,经尿素纯化后,采用CTLL细胞/MTT比色法检测其生物学活性。结果重组表达质粒经双酶切和测序鉴定构建正确;重组菌的最佳开始诱导时间为重组菌发酵培养10 h;重组蛋白相对分子质量约17 400,表达量占菌体总蛋白的19%,纯化后纯度达95%;重组蛋白的生物学活性可达3×105IU/ml。结论原核表达并纯化了具有生物学活性的重组猪IL-2蛋白,为其进一步研究和产业化生产奠定了基础。
【英文摘要】 Objective To express porcine interleukin-2(poIL-2)in prokaryotic cells,purify the expressed product and determine its bioactivity. Methods The poIL-2 gene was amplified by PCR using the genomic RNA extracted from porcine peripheral blood lymphocytes as a template,and inserted into prokaryotic expression vector pBV220. The constructed recombinant plasmid pBV220 / IL-2 was transformed to competent E. coli DH5α,and the recombinants were screened with LB plate containing Amp,then cultured in LB medium. Viable c...
【更新日期】 2014-04-17
【分类号】 S852.4;Q78
【正文快照】 白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)是由T细胞分泌的最主要、生物活性最强的T细胞生长因子之一,在免疫系统中具有十分重要的免疫生理调节效应,其可促进T细胞的生长,诱导CTL、NK和LAK等多种杀伤细胞的分化和效应功能,还可诱导杀伤细胞产生IFNγ、TNF-α等细胞因子,可增强CTL细胞?

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