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【英文篇名】 |
Prokaryotic expression,purification and protein activity of histidinekinase VicK of Streptococcus mutans |
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【下载频次】 |
★★★★★ |
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【作者】 |
钱英子;
黄锐;
李月恒;
周红;
郑玉琪;
张雪梅;
尹一兵;
周智; |
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【英文作者】 |
QIAN Ying-zi;
HUANG Rui;
LI Yue-heng;
ZHOU Hong;
ZHENG Yu-qi;
ZHANG Xue-mei;
YIN Yi-bing;
ZHOU Zhi;
School of Stomatology;
Chongqing Medical University; |
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【作者单位】 |
重庆医科大学口腔医学院;
重庆医科大学检验系; |
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【文献出处】 |
中国生物制品学杂志
, Chinese Journal of Biologicals, 编辑部邮箱
2013年 11期
期刊荣誉：中文核心期刊要目总览 ASPT来源刊 CJFD收录刊 |
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【中文关键词】 |
链球菌;
组氨酸;
蛋白激酶;
原核细胞;
基因表达;
纯化;
激酶活性; |
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【英文关键词】 |
Streptococcus mutans;
Histidine;
Protein Kinase;
Prokaryotic cells;
Gene expression;
Purification;
Kinase activity; |
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【摘要】 |
目的原核表达及纯化变形链球菌组氨酸蛋白激酶VicK,并进行蛋白活性的检测。方法以变形链球菌UA159菌株基因组DNA为模板,PCR扩增VicK基因,插入表达载体pET-28a中,转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)中,IPTG(终浓度为0.01、0.02、0.05、0.1、0.2及0.3 mmol/L)于18及37℃诱导10、15、20 h,表达产物经Ni离子亲和层析柱纯化,采用Kinase-Glo誖激酶发光检测试剂盒检测纯化后目的蛋白的活性。结果重组表达质粒pET-28a-VicK经双酶切及测序鉴定,证明构建正确;表达的重组VicK蛋白相对分子质量约51 000;IPTG终浓度0.3 mmol/L,18℃诱导15 h,可溶性目的蛋白的表达量最高;纯化的目的蛋白纯度>90%,浓度为2 mg/ml;随着VicK蛋白浓度的增加,发光值逐渐降低,表明该蛋白具有体外水解ATP的激酶活性。结论已成功原核表达并纯化了变形链球菌具有激酶活性的VicK蛋白,为后续以此为靶点的抑制物的筛选奠定了实验基础。 |
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【英文摘要】 |
Objective To express the histidinekinase VicK of Streptococcus mutans in prokaryotic cells,purify the expressed product and determine its protein activity. Methods The VicK gene was amplified by PCR using the genomic DNA of S. mutans UA159 strain as a template,and inserted into expression vector pET-28a. The constructed recombinant plasmid pET-28a-VicK was transformed to E. coli BL21(DE3)and induced with IPTG at final concentrations of 0. 01,0. 02,0. 05,0. 1,0. 2 and 0. 3 mmol / L at 18 and 37 ℃ for 10,15 a... |
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【基金】 |
重庆市卫生局科研项目(2011-2-188);
重庆市中医药局科研项目(2010-2-64);
重庆市科委自然科学基金项目(cstc2011jjA10028) |
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【更新日期】 |
2014-03-26 |
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【分类号】 |
R378 |
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【正文快照】 |
变形链球菌作为主要致龋菌,与其他细菌共同黏附于牙齿表面形成生物膜,其致龋作用的发挥多受环境的影响。密度感应系统是其重要的信号传导系统,而双组分调节系统(two-component system,TCS)作为感应外界环境变化和调控内部基因表达的开关,是细胞应对多变外部环境,维持自身存活和 |
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