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人血管内皮生长因子受体-Fc在DG44细胞中的表达及其生物活性  
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【英文篇名】 Expression of human vascular endothelial growth factor receptor-Fc in DG44 cells and biological activity of expressed product
【下载频次】 ★★☆
【作者】 胡伟伟; 范清林; 尼钢钢; 张玲; 黄辉; 宋礼华;
【英文作者】 HU Wei-wei; FAN Qing-lin; Ni Gang-gang; ZHANG Ling; HUANG Hui; SONG Li-hua Department of Biochemistry and Molecular Biology; Life Science School; Anhui University; Hefei 230039; Anhui Province; China;
【作者单位】 安徽大学生命科学学院; 安徽安科生物工程(集团)股份有限公司;
【文献出处】 中国生物制品学杂志 , Chinese Journal of Biologicals, 编辑部邮箱 2013年 08期  
期刊荣誉：ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 血管内皮生长因子受体; 免疫球蛋白G; Fc段; 中国仓鼠卵巢细胞; 生物活性;
【英文关键词】 Vascular endothelial growth factor receptor(VEGFR); Immunoglobulin G; Fc fragment; Chinese hamster ovary(CHO)cells; Biological activity;
【摘要】 目的在中国仓鼠卵巢细胞DG44中表达人血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR)-Fc,并检测其生物活性。方法化学合成人VEGFR1的第2免疫球蛋白结构域(VEGFR1D2)基因和人VEGFR2的第3免疫球蛋白结构域(VEGFR2D3)基因,通过重叠PCR(Overlap PCR)将VEGFR1D2-VEGFR2D3和人IgG1Fc拼接形成VEGFR-Fc融合基因,插入真核表达载体pD2中,构建重组表达质粒pD2-VEGFR-Fc,在FreeStyleTMMAX Reagent和OptiPROTMSFM介导下转染至DG44细胞中,MTX加压筛选稳定表达VEGFR-Fc蛋白的细胞株,SDS-PAGE、Western blot和ELISA法检测细胞培养上清中VEGFR-Fc蛋白的表达。表达的VEGFR-Fc蛋白经HiTrapTMProteinA FF柱纯化后,利用显微镜观察法和血管内皮细胞ECV304模型检测其生物活性。结果 VEGFR-Fc基因扩增产物大小为1 377 bp;重组表达质粒pD2-VEGFR-Fc经双酶切和测序证明构建...
【英文摘要】 Objective To express human vascular endothelial growth factor receptor(VEGFR)-Fc in Chinese hamster ovary(CHO)DG44 cells and determine its biological activity.Methods The sequence VEGFR1D2-VEGFR2D3 encoding the second and the third human immunoglobulin domains of VEGFR2 was synthesized,and fused with human IgG1Fc by overlap PCR to generate VEGFR-Fc fusion gene,which was then subcloned into eukaryotic expression plasmid pD2.The constructed recombinant plasmid pD2-VEGFR-Fc was transfected to DG44 cells in med...
【更新日期】 2013-09-02
【分类号】 R363
【正文快照】 血管生成在胚胎发育、创伤愈合、组织再造、肿瘤生长和转移过程中起着重要作用,其为一个受正负因素调控的多步骤复杂过程[1-2]。在正常情况下,正负因素调控保持动态平衡,一旦平衡被打破,血管生成就会出现异常。异常的血管生成是一些疾病的病理基础[3-4],如肿瘤和湿性老年性黄斑

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