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利用Cre/LoxP系统删除转基因山羊体内的选择标记基因  
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【英文篇名】 Deletion of marker gene in transgenic goat by Cre/LoxP system
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【作者】 兰翀; 任丽娜; 吴敏; 刘思国; 刘国辉; 徐旭俊; 陈建泉; 马恒东; 成国祥;
【英文作者】 Chong Lan; Lina Ren; Min Wu; Siguo Liu; Guohui Liu; Xujun Xu; Jianquan Chen; Hengdong Ma; Guoxiang Cheng; Institute of Animal Genetics and Breeding; Sichuan Agricultural University; Shanghai Engineering Research Center of Transgenic Animal breeding and Pharmaceutical / Shanghai Genon Bioengineering Co. Ltd.;
【作者单位】 四川农业大学动物遗传育种研究所; 上海转基因动物育种与制药工程技术研究中心上海杰隆生物工程股份有限公司;
【文献出处】 生物工程学报 , Chinese Journal of Biotechnology, 编辑部邮箱 2013年 12期  
期刊荣誉:中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 转基因山羊; Cre/LoxP; 基因敲除; 标记基因;
【英文关键词】 transgenic goat; Cre/LoxP; knockout genes; selectable marker genes;
【摘要】 在制备转基因家畜过程中的一个关键步骤是使用选择标记基因(Selectable marker genes,SMGs)将转基因整合细胞从大量的正常细胞中筛选出来,这导致了SMGs整合入家畜的基因组内持续传递给后代。SMGs已被证明能够显著影响基因组内整合位点处的基因调控,也增加了对转基因动物安全评价的复杂性。为了确定转基因山羊制备过程中SMGs的删除时机和删除方法,在体细胞克隆前后两个时段内,利用Cre/LoxP系统删除SMGs的可行性,同时比较了蛋白转导和质粒共转染两种Cre导入方式的删除效率。结果表明:尽管在首次对山羊成纤维细胞进行遗传修饰后即可进行SMGs删除,但两次遗传修饰导致细胞严重老化,无法用于后续的体细胞克隆羊制备。在转基因山羊的成体细胞中删除SMGs不存在上述问题,成功率高,缺点是试验周期长、耗资增大。Cre表达质粒瞬时转染能够删除SMGs,但有超过30%的无SMGs细胞克隆中整合有质粒序列。TAT-CRE蛋白质转导方法可以避免引入的新外源基因,SMGs删除率达到43.9%~72.8%,是一种较佳的SMGs删除手段。
【英文摘要】 In producing transgenic livestock, selectable marker genes(SMGs) are usually used to screen transgenic cells from numerous normal cells. That results in SMGs integrating into the genome and transmitting to offspring. In fact, SMGs could dramatically affect gene regulation at integration sites and also make the safety evaluation of transgenic animals complicated. In order to determine the deletion time and methods in the process of producing transgenic goats, the feasibility of deleting SMGs was explored by ...
【基金】 上海市科技术带头人(No.11XD1422000); 上海市“科技创新行动计划”(No.11431921400); 上海市科委研发基地建设项目(No.10dz2251700)资助~~
【更新日期】 2014-04-14
【分类号】 S827;S814.8
【正文快照】 转基因技术是当今基因工程领域中的重要应用性新技术。在植物新品种培育方面,利用转基因技术已获得了许多植物新品种,显著改善了农艺性状[1]。但在家畜新品种培育方面,转基因技术的成功案例仅局限在牛、羊上的几例[2],还需要进行完善和优化。目前,转基因家畜主要是通过体细胞遗

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