极耐热性β-葡萄糖苷酶基因克隆、超量表达及其在天然蓝色素工业化生产中的应用

【摘要】 从嗜热菌属的海栖热袍菌(Thermotoga maritima MSB8 ATCC43589)中扩增出编码极耐热性β-葡萄糖苷酶基因A,连接到新型热激载体pHsh上,得到重组质粒pHsh-bglA-WT和pHsh-bglA-M,并在大肠杆菌中实现了高水平可溶性表达,比酶活分别为25.7 U/mg和107.1 U/mg。通过热处理和DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析两步纯化方法处理后,经SDS-PAGE检测条带单一,比酶活达到1 746.2 U/mg,纯化倍数16.2,得率为17.5%。β-葡萄糖苷酶在以栀子苷和甘氨酸为原料的情况下,按照8.8∶1.4的比例,80℃条件下反应3 h,获得大量可食天然蓝色素,得到的天然蓝色素的色价E(1%)为426。更多还原