TP17蛋白的重组表达及其在梅毒血清学诊断中的初步应用

【摘要】 目的通过基因工程技术获得梅毒重组蛋白TP17,并探索其在梅毒血清学诊断中的初步应用。方法以PCR扩增获得TP17基因,构建pET28b-TP17原核表达载体,将其转化到大肠杆菌BL21中,以IPTG诱导蛋白表达,重组蛋白经镍柱纯化后,以飞行时间质谱和免疫印迹法进行鉴定。建立基于TP17的ELISA间接法,通过检测临床患者的血清标本,评价其与化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)和梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)的检测符合率。结果成功构建了原核表达载体pET28b-TP17,重组蛋白TP17以包涵体形式存在,分子量约20kD。质谱和免疫印迹分析表明重组蛋白为梅毒蛋白TP17,并且能够与梅毒阳性血清发生特异性反应。基于TP17的ELISA法与CMIA法和TPPA法的符合率均为99.2%(125/126),3种方法检测梅毒特异性抗体的差异无统计学意义。结论基因工程技术获得的重组蛋白TP17能够与梅毒阳性血清发生特异性反应,有良好的临床应用前景。更多还原