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肽核酸钳制PCR早期检测乙型肝炎病毒YMDD耐药变异  
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【英文篇名】 Identification of hepatitis B virus YMDD point mutation using peptide nucleic acid clamping PCR
【下载频次】 ★★★
【作者】 张迎迎; 何海棠; 杨洁; 侯金林;
【英文作者】 ZHANG Yingying; HE Haitang; YANG Jie; HOU Jinlin Depatment of Infectous Diseases; Nanfang Hospital; Southern Medical University; Guangzhou 510515; China;
【作者单位】 南方医科大学南方医院感染内科;
【文献出处】 南方医科大学学报 , Journal of Southern Medical University, 编辑部邮箱 2013年 06期  
期刊荣誉：中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 乙型肝炎病毒; 肽核酸钳制PCR; 直接测序法;
【英文关键词】 hepatitis B virus; peptide nucleic acid; PCR; direct sequencing;
【摘要】 目的建立乙型肝炎病毒肽核酸钳制PCR(PNA-PCR)耐药监测方法,以提前监测乙型肝炎病毒YMDD耐药株的产生。方法选取rtM204(IATT)、rtM204V(GTG)突变型质粒与野生型质粒rtM204(ATG)按照不同比例混合后,用PNA-PCR法及直接测序法对耐药位点进行检测,评价两种方法的灵敏度及特异性;选取临床耐药检测患者血清标本85例,采用PNA-PCR法及直接测序法进行耐药检测,比较两种方法的耐药检出率。结果 PNA-PCR法可在105倍野生型YMDD基因背景下检测出突变,灵敏度为0.001%,可检测到最低限为101拷贝。而直接测序法可检测的基因突变的最低极限为104拷贝,检测灵敏度为10%。85例临床耐药检测患者中,PNA-PCR法YMDD检测阳性率为85.9%(73/85∶YIDD∶40,YVDD∶23,YIDD+YVDD∶10),而PCR产物直接测序法检阳性率仅为40%(34/85∶YIDD∶21,YVDD∶11,YIDD+YVDD∶2)。阴性对照,两种方法均未测出HBV病毒,两种方法的特异性均较好。结论 PNA-PCR方法在灵敏度及特异性上均优于直接测序法,而且操作简便,快捷,在科研和临...
【英文摘要】 Objective To establish a peptide nucleic acid clamping PCR assay for detecting hepatitis B virus(HBV) drug resistance mutation.Methods RtM204I(ATT) mutant,rtM204V(GTG) mutant and rtM204(ATG) wild-type plasmids mixed at different ratios were detected for mutations by PNA clamping PCR assay and direct sequencing,and the sensitivity and specificity of the two methods were compared.Serum samples from 85 patients with chronic HBV infection were detected for drug resistance using the two methods.Results The sensi...
【基金】 国家自然科学基金(30872245)~~
【更新日期】 2013-07-16
【分类号】 R440
【正文快照】 长期治疗过程中产生耐药是慢性乙型肝炎患者抗病毒治疗的一个难题。耐药后会引起病毒学突破、肝炎的急性加重、肝脏失代偿,甚至死亡。因此早期发现耐药变异,对于指导患者长期有效的抗病毒治疗有重要意义。目前应用于YMDD耐药变异检测的分子生物学方法主要有PCR产物直接测序法、

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