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慢病毒转染人角质形成细胞高表达核纤层蛋白B1  
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【英文篇名】 Over-expression of lamin B1 in human immortal keratinocyte through lentiviral vector
【下载频次】 ★★★★☆
【作者】 李睿夫; 彭代智; 钱卫; 王丽华; 何斌; 刘小玲; 舒文婷; 刘潇; 周新; 刘敬;
【英文作者】 Li Ruifu; Peng Daizhi; Qian Wei; Wang Lihua; He Bin; Liu Xiaoling; Shu Wenting; Liu Xiao; Zhou Xin; Liu Jing(State Key Laboratory of Trauma; Burns and Combined Injury; Institute of Burns; Southwest Hospital; Third Military Medical University; Chongqing; 40038; China);
【作者单位】 第三军医大学西南医院全军烧伤研究所; 创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室;
【文献出处】 第三军医大学学报 , Journal of Third Military Medical University, 编辑部邮箱 2013年 09期  
期刊荣誉：中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 人角质形成细胞; 慢病毒; 蛋白组学; 核纤层蛋白B1;
【英文关键词】 human keratinocyte; lentiviral vector; proteomics; lamin B1;
【摘要】 目的通过对慢病毒载体稳定转染人角质形成细胞(HaCaT)株和未转染HaCaT细胞进行比较蛋白组学分析,找出其差异表达蛋白,寻找基因修饰组织工程表皮种子细胞生长特性改变的原因和可能存在的成瘤性安全隐患。方法选择慢病毒载体稳定转染后生长特性发生明显改变的转染株细胞,采用二维电泳技术对该转染株和未转染株的总蛋白进行分离和比较,找出差异表达蛋白点,再进行串联质谱鉴定。从鉴定得到的差异蛋白中选择可能与细胞生长特性改变和肿瘤生成相关的核纤层蛋白B1(lamin B1)采用Western blot和实时荧光定量PCR技术(qPCR)对其表达差异进行验证。结果与未转染株比较,转染株在二维电泳中存在11个差异表达蛋白点,质谱从其中鉴定出7个蛋白质。选取其中与细胞增殖和凋亡相关的核纤层蛋白B1通过WB和qPCR证实其在转染株中蛋白和转录水平均存在明显的高表达。结论慢病毒载体稳定转染株HaCaT细胞株相对未转染株核纤层蛋白B1高表达。这种高表达可能与转染株细胞生长特性改变和潜在的成瘤性隐患相关。
【英文摘要】 Objective To determine the differences of human immortal keratinocyte line HaCaT with or without lentivius-mediated CCL20 over-expression by proteomic analysis in order to investigate the cause of altered growth characteristics and potential threat of tumorigenicity in the seed cells for gene-modified tissue engineering.Methods Lentiviral vector(pHSER-CCL20-shRNA-GFP)-infected HaCaT cells with significant changes in growth characteristics and uninfected HaCaT cells were chosen as experimental and control ce...
【基金】 国家自然科学基金面上项目(81071575); 国家重点实验室自主研究课题Ⅰ类(SKLZZ200904)~~
【更新日期】 2013-06-12
【分类号】 R373
【正文快照】 病毒载体整合造成的癌基因激活和成瘤性改变一直是病毒载体介导的基因疗法可能产生的并发症中最为严重而致命的一种[1-2]。我们在利用CCL20基因特异性shRNA重组慢病毒载体感染人永生化角质形成细胞(HaCaT),以制造并筛选低免疫排斥反应的异基因组织工程皮肤种子细胞的过程中[3],

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