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大豆天冬酰胺合成酶B基因的克隆及在大肠杆菌中的表达  
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【英文篇名】 Clone of soybean asparagine synthetase B gene and its expression in E.coli
【下载频次】 ★★★★☆
【作者】 张继; 王相晶; 于丹; 王晴; 向文胜;
【英文作者】 ZHANG Ji1; WANG Xiangjing1; YU Dan2; WANG Qing1; XIANG Wensheng1(1.School of Life Sciences; Northeast Agricultural University; Harbin 150030; China; 2.Heilongjiang Agricultural Vocational and Technical College; Jiamusi Heilongjiang 154007; China);
【作者单位】 东北农业大学生命科学学院; 黑龙江农业职业技术学院;
【文献出处】 东北农业大学学报 , Journal of Northeast Agricultural University, 编辑部邮箱 2013年 07期  
期刊荣誉:中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 天冬酰胺合成酶B; 克隆; 表达;
【英文关键词】 asparagine synthetase; clone; expression;
【摘要】 根据GenBank登陆大豆天冬酰胺合成酶(AS-B)基因序列(登录号:GMU55874)设计特异引物,通过PCR扩增从大豆(Glycine max)cDNA中克隆出AS-B基因。将该基因克隆到pET30a(+)载体,构建重组表达载体pET30a-AS,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)pLysS,并进行表达条件优化。结果表明,在16℃条件下,经0.5mmol·L-1IPTG诱导14 h,大部分重组AS-B以可溶性蛋白的形式存在。经Ni-NTA亲和层析和Sephadex G50脱盐后,重组蛋白产率为23.4 mg·L-1,纯度>90%,以L-谷氨酰胺和NH4Cl为氮源供体时,其比活力分别为2.32和2.60μmol·min-1.mg-1。研究结果为研究大豆AS-B结构与功能和酶催化动力学机制及建立AS-B抑制剂的高通量筛选平台奠定基础。
【英文摘要】 According to the sequence of asparagine synthetase(AS-B) gene in soybean(GenBank accession number: GMU55874),a pair of specific primers was designed to obtain the AS-B gene from Glycine max by PCR amplification using cDNA as template.The gene of AS-B was then cloned into prokaryotic expression vector pET30a(+),constructing a recombinant expression vector pET30a-AS,which was introduced into E.coli Rosetta(DE3) pLysS.After the optimization of induced conditions,recombinant AS-B was expressed in a soluble form...
【基金】 国家自然科学基金项目(31000884); 东北农业大学博士启动基金项目(2012RCB05); 中国博士后科学基金项目(20110491023); 黑龙江省博士后科学基金项目(LBH-Z11234)
【更新日期】 2013-09-03
【分类号】 S565.1
【正文快照】 天冬酰胺合成酶B(AS-B,EC 6.3.5.4)是广泛存在于原核和真核生物体内的氨基转移酶家族成员之一,以铵或谷氨酰胺(Gln)为氮源供体催化天冬氨酸(Asp)合成天冬酰胺(Asn)[1]。Asn具有氮碳比高、溶解性、稳定性及移动性强等优点,是植物氮代谢过程中有机氮运输和储存主要形式之一[2]。?

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