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蛋白质Sumo化修饰原核表达系统的构建  
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【英文篇名】 Construction of protein Sumoylation system in prokaryotic cell
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【作者】 唐波; 杜娟; 杨力侠; 王小海; 吴海波; 吴勇延; 郭泽坤;
【英文作者】 TANG Bo; DU Juan; YANG Li-xia; WANG Xiao-hai; WU Hai-bo; WU Yong-yan; GUO Ze-kun(College of Life Sciences; Northwest A&F University; Yangling; Shaanxi 712100; China);
【作者单位】 西北农林科技大学生命科学学院;
【文献出处】 西北农林科技大学学报(自然科学版) , Journal of Northwest A & F University(Natural Science Edition), 编辑部邮箱 2012年 10期  
期刊荣誉:中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  中国期刊方阵  CJFD收录刊
【中文关键词】 Sumo; 蛋白质体外修饰; 原核表达; Oct4; Sox2;
【英文关键词】 Sumo; in vitro protein modification; prokaryotic expression; Oct4; Sox2;
【摘要】 【目的】构建一种可获得Sumo修饰蛋白的原核表达系统,为Sumo化修饰蛋白的批量制备奠定基础。【方法】用Trizol裂解法提取小鼠畸胎瘤细胞F9的总RNA,反转录成cDNA后PCR扩增获得Sumo1、Ubc9、Sae2和Sae1基因。将上述基因及相应载体酶切、连接后构建出重组质粒pACYC-Ubc9-Sumo1、pCDF-Sae2-Sae1。采用质粒转化-制备阳性克隆感受态细胞-质粒转化的方法获得pACYC-Ubc9-Sumo1和pCDF-Sae2-Sae1共表达的Su-mo化修饰的原核表达系统。以pGEX-GST-Sox2和pGEX-GST-Sox2K247R重组质粒为例,采用Western Blot检测蛋白质Sumo化修饰原核表达系统的有效性。用另一Sumo修饰底物Oct4及其Sumo修饰位点突变的突变体Oct4K118R转化原核Sumo修饰系统,并连续传代,检测蛋白质Sumo化修饰系统的实用性及遗传稳定性。【结果】构建的蛋白质Sumo化修饰原核表达系统可特异修饰Sumo1的底物Sox2和Oct4;含有Oct4原核表达载体的蛋白质Sumo化修饰系统可稳定传至15代,系统的稳定性较好。【结论】获得了成本较低...
【英文摘要】 【Objective】 The protein Sumoylation system was constructed in Prokaryotic cell to lay a foundation for quantity production of sumoylated protein.【Method】 Total RNA was extracted from the mouse teratoma cells F9 with Trizol reagent,reverse transcripted to cDNA,thus obtaining the genes of Sumo1,Ubc9,Sae2,Sae1 fragments by the standard PCR from cDNA.The above fragments and vectors were double digested with enzymes respectively,then they were ligated to constructed recombinate plasmids.The Sumo ylation prokaryo...
【基金】 国家自然科学基金项目(30870266)
【更新日期】 2012-10-31
【分类号】 Q78
【正文快照】 Sumo(Small Ubiquitin-Related Modifier)是类泛素样小分子蛋白质的总称,因与泛素具有相似的空间结构和作用方式而得名。Sumo在真核生物中广泛存在,对基因的表达、染色体的损伤修复和重组及蛋白质的稳定性、细胞内定位和相互作用等都有调节作用。研究表明,肿瘤抑制因子p53的Sum

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