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百日咳丝状血凝素酶联免疫检测法的建立  
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【英文篇名】 Establishment of ELISA in determination of filamentous hemagglutinin in DTaP
【下载频次】 ★★★
【作者】 潘殊男; 肖詹蓉; 史雨舟; 张霖阳; 王宇星; 李世慧; 韩凝; 张萍;
【英文作者】 PAN Shu-nan*; XIAO Zhan-rong; SHI Yu-zhou; ZHANG Lin-yang; WANG Yu-xing; LI Shi-hui; HAN Ning; ZHANG Ping (* Reseach Division of Bacterial Vaccine; Beijing Tiantan Biological Products Co.; Ltd.; Beijing 100024; China);
【作者单位】 北京天坛生物制品股份有限公司;
【文献出处】 微生物学免疫学进展 , Progress in Microbiology and Immunology, 编辑部邮箱 2012年 04期  
期刊荣誉：ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 百日咳; 丝状血凝素; 酶联免疫吸附试验;
【英文关键词】 Pertussis; Filamentous hemagglutinin(FHA); Enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA);
【摘要】 目的建立百日咳组分疫苗丝状血凝素(FHA)抗原含量监控的ELISA检测法。方法制备的多克隆抗血清,经辛酸硫酸铵法纯化抗体,用过碘酸钠氧化法辣根过氧化物酶标记,以棋盘滴定法确定最佳包被抗体及酶标抗体的浓度配伍,建立了双抗体夹心ELISA检测法。结果对双抗体夹心ELISA法的特异性、最佳线性范围、检测限度、精密度、准确度、测定限量、适用性的一系列验证试验表明,该方法与百日咳组分疫苗中PT和Prn无明显交叉反应,特异性较好。在0至20 ng/mL测量区间有最佳线性,相关系数大于0.99;经实验内12次及不同试验间3次测定16、8、4 ng/mL中的FHA含量,变异系数在0.2%～11.4%间,回收率在96.9%～114.5%间,精密度及准确度验证均符合常规质控要求,因此测定限量为4 ng/mL。结论该方法能有效检测出百日咳杆菌培养上清中的FHA含量,可用于百日咳组分疫苗生产过程的中间品质量控制。
【英文摘要】 Objective To develop an ELISA in quantitative determination of filamentous hemagglutinin(FHA) in DTaP(diphtheria,tetanus and acellular pertussis combined vaccine,adsorbed).Methods The high potency antisera for FHA were obtained by using FHA immunized rabbit,the polyclonal antibody was purified by capric acid and ammonium sulphate precipitation,the antibody was coupled to horseradish peroxidase(HRP)by periodate oxidase method in order to develop a double antibody sandwich ELISA in quantitative determination ...
【基金】 国家“十二五”重大新药创制药物大品种技术改造项目(2012ZX09201301-001
【更新日期】 2012-10-22
【分类号】 R392.1
【正文快照】 自中国无细胞百白破疫苗(DTaP)诞生以来,仅用电泳法和血凝法对抗原进行定性和半定量检测[1],由于缺乏精确而特异的对抗原进行定量检测的质控方法,已成为制品的工艺升级换代及常规质量控制的瓶颈。欧美国家的DTaP,百日咳抗原的各组分的质量监控均采用酶标法(ELISA)[2]。实验中拟

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