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肠道病毒71型3C基因原核表达质粒的构建表达及纯化  
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【英文篇名】 Construction and expression of prokaryotic expression vector for 3C gene of enterovirus 71 and purification of expressed product
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【作者】 江月; 丛浩龙; 李梨;
【英文作者】 JIANG Yue; CONG Hao-long; Li Li(Department of Biochemistry and Molecular Biology; Chongqing Medical University; Chongqing; 400016; China);
【作者单位】 重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室;
【文献出处】 中国生物制品学杂志 , Chinese Journal of Biologicals, 编辑部邮箱 2012年 12期  
期刊荣誉:ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 肠道病毒A型; ; 3C蛋白; 原核细胞; 基因表达; 纯化;
【英文关键词】 Enterovirus type A; human; 3C Protein; Prokaryotic cells; Gene expression; Purification;
【摘要】 目的构建肠道病毒71型(Entervirus71,EV71)3C基因的原核表达质粒,在大肠杆菌中进行表达并纯化。方法以病毒的反转录产物为模板,PCR扩增EV71 3C基因,克隆至pGEx-4T-1载体中,构建重组表达质粒pGEx-3C,转化大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达。表达的重组融合蛋白GSR-3C经GST-Agarose亲和层析和分子筛层析纯化后,Western blot检测其反应原性。结果重组表达质粒pGEx-3C经双酶切及测序证实构建正确;表达的重组融合蛋白相对分子质量约46 000,表达量约占菌体总蛋白的50%,主要以可溶性形式表达;纯化后的重组融合蛋白纯度大于90%,可与小鼠抗EV71单克隆抗体特异性结合。结论成功构建了重组表达质粒pGEx-3C,在大肠杆菌中高效分泌表达并纯化了重组GST-3C融合蛋白,为EV713C蛋白酶结构与功能的研究及3C靶向药物和疫苗的研究奠定了基础。
【英文摘要】 Objective To construct the prokaryotic expression vector for 3C gene of enterovirus 71(EV71),express in E.coli and purify the expressed product.Methods The 3C gene of EV71 was amplified by PCR using the reverse transcription product of the virus as template,and cloned into vector pGEx-4T-1.The constructed recombinant plasmid pGEx-3C was transformed into E.coli BL21(DE3)for expression under induction of IPTG.The expressed recombinant fusion protein GST-3C was purified by GST-Agarose affinity chromatography a...
【更新日期】 2013-01-08
【分类号】 R373.2
【正文快照】 手足口病是由多种肠道病毒引起的常见传染病,以婴幼儿发病为主。近年来,该病在亚太地区呈上升趋势[1]。2010年1~4月,我国共发病192 300例,比2009年同期增长40%[2]。肠道病毒71型(Entervirus71,EV71)是引起手足口病的最主要病毒之一,属小核糖核酸病毒科肠道病毒属,为无包膜,单?

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