hsa-miR-150慢病毒表达质粒的构建及鉴定-中国学术期刊网络出版总库

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hsa-miR-150慢病毒表达质粒的构建及鉴定

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【英文篇名】	Construction and identification of lentiviral expression vector hsa-miR-150
【下载频次】	★★★★☆
【作者】	张俊; 张涛; 王勃; 李少林;
【英文作者】	ZHANG Jun; ZHANG Tao; WANG Bo; LI Shao-lin(Department of Radiology; Chongqing Medical University; Chongqing 400016; China);
【作者单位】	重庆医科大学放射医学教研室; 重庆医科大学附属第一医院肿瘤科;
【文献出处】	中国生物制品学杂志 , Chinese Journal of Biologicals, 编辑部邮箱 2012年 02期期刊荣誉：ASPT来源刊 CJFD收录刊
【中文关键词】	微RNAs; hsa-miR-150; 慢病毒载体; 肝肿瘤;
【英文关键词】	MicroRNAs; hsa-miR-150; Lentiviral vector; Liver tumor;
【摘要】	目的构建hsa-miR-150慢病毒表达质粒,并鉴定其感染肝癌细胞系Hep3B后miR-150的表达水平。方法根据hsa-miR-150序列化学合成hsa-miR-150基因片段,克隆至慢病毒载体pGIPZ上,构建重组慢病毒表达质粒pGIPZ-hsa-miR-150,转染包装细胞293T进行包装,检测病毒滴度。收获并浓缩重组慢病毒颗粒,稳定转染Hep3B细胞,流式细胞术检测GFP的表达率;荧光定量PCR检测miR-150的表达水平。结果重组慢病毒表达质粒pGIPZ-hsa-miR-150经菌落PCR及测序证实构建正确;重组慢病毒的滴度约为5.7×108 TU/ml;稳定转染Hep3B细胞后,GFP的表达率为(97.78±1.14)%,重组慢病毒转染组miR-150的表达水平较空白对照组增加约6倍(P<0.05)。结论成功构建了hsa-miR-150慢病毒表达质粒,其在Hep3B细胞中可高效表达,为进一步研究miR-150的生物学功能奠定了基础。
【英文摘要】	Objective To construct lentiviral expression vector hsa-miR-150 and determine the expression of miR-150 in infected hepatocellular carcinoma cell line Hep3B.Methods The hsa-miR-150 gene fragment was synthesized chemically and cloned into lentiviral vector pGIPZ.The constructed recombinant plasmid pGIPZ-hsa-miR-150 was transfected to packaging cell line 293T,and the packaged virus was determined for titer.Recombinant lentivirus particles were harvested and concentrated,then stably transfected to Hep3B cells ...
【基金】	国家自然科学基金(30970843)
【更新日期】	2012-02-28
【分类号】	R318
【正文快照】	微小RNA(microRNA,miRNA)是近年发现的一种长度约为21～23个核苷酸的非编码小分子单链RNA,可通过与靶基因mRNA 3′端非编码区(UTRs)完全或不完全互补结合,抑制靶mRNA翻译或降解靶mRNA,从而发挥RNA干扰作用,在转录后水平调控基因的表达[1]。作为生命过程中一类重要的调节分子,mi

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