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猪乙型脑炎病毒E-Ⅲ抗原域蛋白间接ELISA的建立及应用

Establishment of an Indirect ELISA Assay for the Ⅲ Antigenic Region of Japanese Encephalitis Virus’s E Protein and Its Initial Application

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【作者】 郭锐田永祥周丹娜段正赢杨克礼闫少侠郑尤佳梁望旺刘泽文

【Author】 GUO Rui1,TIAN Yong-xiang1,ZHOU Dan-na1,DUAN Zheng-ying1,YANG Ke-li1,YAN Shao-xia2,ZHENG You-jia3,LIANG Wang-wang1,LIU Ze-wen1(1.Institute of Animal Husbandry and Veterinary/Hubei Key Laboratory of Animal Embryo and Molecular Breeding,Hubei Academy of Agricultural Science,Wuhan 430064,China;2.College of Veterinary Medicine,Huazhong Agricultural University,Wuhan 430070,China;3.Animal Breeding Center of Hubei Province,Wuhan 430070,China)

【机构】 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所/动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室华中农业大学动物医学院湖北省畜禽育种中心

【摘要】 该研究利用纯化后的流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)E-Ⅲ抗原域蛋白,将其作为包被抗原,建立了间接ELISA检测方法。试验的最佳反应条件为:最佳抗原包被浓度为17.5μg/mL,血清抗体稀释度为1∶4,酶标二抗稀释度为1∶5 000,封闭液和稀释液用含0.4%BSA的PBST。采用该方法对127份临床样品进行检测,结果显示,与商品试剂盒检测结果比较符合率达到90.00%。因此,该研究建立的流行性乙型脑炎间接ELISA检测方法具有良好的稳定性和可重复性,并具有较高的特异性和敏感性。

【Abstract】 The Ⅲ antigenic region of Japanese encephalitis virus’s E protein was used as a coating antigen to establish an indirect ELISA assay.The factors affecting the experiments were optimized as using 17.5 μg/mL E protein as coating antigen,1∶4 dilution of testing serum and 1∶5 000 dilution of HRP-labeled goat anti-swine IgG,PBST containing 0.4% BSA as the blocking buffer and diluting buffer.127 serum samples were detected by this assay,which showed 90.00% agreement with ELISA kit.The results showed that the indirect ELISA had good reliability,speciality and sensitivity for clinic serum samples.

【基金】 湖北省自然科学基金项目(2011CDB123);湖北省农业科技创新中心资助项目(2011-620-001-03);动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室开放课题项目(2010ZD158)
  • 【文献出处】 湖北农业科学 ,Hubei Agricultural Sciences , 编辑部邮箱 ,2012年22期
  • 【分类号】S858.28
  • 【被引频次】2
  • 【下载频次】75
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