【摘要】 为建立快速、敏感的牛结核分枝杆菌检测方法,本研究利用两株牛γ干扰素(IFN-γ)的单克隆抗体(MAb)建立检测牛IFN-γ的抗原捕获夹心ELISA方法。通过优化反应条件,确定抗体包被浓度为5μg/mL;全血刺激上清最佳稀释倍数为1∶2,作用时间为1 h;最佳酶标抗体作用时间为1 h;底物作用时间为15 min。该方法对重组牛IFN-γ的最小检测量可达25 pg/mL,对重组和天然牛的IFN-γ均具有特异性,与IFN-α、IFN-β或白细胞介素4为阴性反应;与山羊和绵羊的IFN-γ呈阳性反应,而与猪、鸡、鹿、犬和人的IFN-γ呈阴性反应。通过对177头牛进行检测,该方法与皮内变态反应的符合率为78.9%,与进口试剂盒的符合率为89.8%,表明该方法具有良好的应用价值。本研究为牛结核早期及其潜伏期感染的监测及流行病学调查提供了快速敏感的检测方法。更多还原

【Abstract】 To diagnosis of bovine tuberculosis(TB),an IFN-γ capture sandwich ELISA was developed using two bovine IFN-γ monoclonal antibodies.The assay was highly specific and had no cross reaction with bovine IFN-α,IFN-β and IL-4 or IFN-γ from swine,deer,avian,canine or human,but reacted with IFN-γ from sheep and goat.There was 78.9% agreement in comparison with the tuberculin skin test and 89.8% with the imported commucial ELISA kit.This method provides a rapid and sensitive method for surveillance and epidemiological investigation of TB in early and latent infection period.更多还原