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重组鼠疫耶尔森菌LcrV抗原制备工艺的建立  
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【英文篇名】 Development of a Procedure for Preparation of Recombinant Yersinia pestis LcrV Antigen
【下载频次】 ★★★
【作者】 胡丽娜; 常娅莉; 魏东; 万艳; 马维民; 傅林锋; 王革; 吴智远; 韩少波; 王秉翔;
【英文作者】 HU Li-na; CHANG Ya-li; WEI Dong; WAN Yan; MA Wei-min; FU Lin-feng; WANG Ge; WU Zhi-yuan; HAN Shao-bo; WANG Bing-xiang(Lanzhou Institute of Biological Products; Lanzhou 730046; China);
【作者单位】 兰州生物制品研究所; 中国食品药品检定研究院细菌一室;
【文献出处】 中国生物制品学杂志 , Chinese Journal of Biologicals, 编辑部邮箱 2011年 12期  
期刊荣誉：ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 耶尔森菌; 鼠疫; LcrV抗原; 大肠杆菌; 发酵; 纯化;
【英文关键词】 Yersinia; pestis; LcrV antigen; E.coli; Fermentation; Purification;
【摘要】 目的建立稳定、高效的重组鼠疫耶尔森菌LcrV抗原工程菌的发酵与纯化工艺。方法研究LcrV工程菌pET-V/BL21(DE3)在试管和三角摇瓶中的生长和表达规律,对种子培养基、IPTG诱导时机、诱导时间及诱导浓度进行优化,并放大至30 L发酵罐培养,建立稳定的发酵工艺。收获菌体,经冻融、离心收集蛋白溶液,高压匀浆处理后,分别采用Q.Sepharose HP阴离子交换层析、Phenyl Sepharose 6 FF(hs)疏水层析及Superdex 75 pg凝胶过滤层析三步柱层析纯化,建立稳定的纯化工艺,连续纯化3批,并按《中国药典》三部(2010版)的相关要求进行全面检定。结果经优化的条件培养及诱导表达,工程菌的收菌密度(A600值)可达34,LcrV抗原的表达量达36%,含量为1.6 g/L。发酵产物经柱层析纯化,LcrV产量高于140 mg,纯度大于95%,蛋白总回收率达8.5%以上。各项检定指标均符合《中国药典》三部(2010版)的相关要求。结论已建立了稳定的、适合规模化生产的LcrV制备工艺,为新型鼠疫组分疫苗的研制奠定了基础。
【英文摘要】 Objective To develop a stable and effective procedure for fermentation of recombinant Yersinia pestis and purification of LcrV antigen.Methods The regularity of growth of recombinant E.coli strain pET-V / BL21(DE3) in tube and in conical flask as well as expression of LcrV antigen were investigated,based on which the medium,time point and duration for induction with IPTG and IPTG concentration were optimized and scaled up to a 30 L fermenter to develop a stable fermentation procedure.The harvested bacteria ...
【基金】 国家“863”课题(2006AA02Z461)
【更新日期】 2011-12-27
【分类号】 R378.61
【正文快照】 目前,国内外人用鼠疫减毒活疫苗和灭活全菌体疫苗在免疫效果和接种反应方面均存在一定缺陷,因此研制一种保护力更强的新型鼠疫组分疫苗十分必要。鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis)LcrV抗原是鼠疫耶尔森菌主要的毒力因子之一。鼠疫耶尔森菌的众多抗原蛋白中,LcrV具有较高的免疫原?

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