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随机组合多表位恶性疟疾疫苗M.RCAg-1蛋白的纯化及鉴定  
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【英文篇名】 Purification and Identification of Randomly Recombinant Multiepitope Protein M.RCAg-1 of Plasmodium falciparum Vaccine
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【作者】 王健; 孙成金; 李莉莉; 陈祥鹏; 李军; 王恒; 张振龙;
【英文作者】 WANG Jian; SUN Cheng-jin; LI Li-li; CHEN Xiang-peng; LI Jun; WANG Heng; ZHANG Zhen-long(National Vaccine & Serum Institute; Beijing 100024; China);
【作者单位】 北京生物制品研究所第四研究室; 北京协和医学院基础学院病原生物学系;
【文献出处】 中国生物制品学杂志 , Chinese Journal of Biologicals, 编辑部邮箱 2011年 12期  
期刊荣誉：ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 M.RCAg-1蛋白; 多表位蛋白; 疟疾疫苗;
【英文关键词】 M.RCAg-1 protein; Multiepitope protein; Malaria vaccine;
【摘要】 目的纯化随机组合多表位恶性疟疾疫苗M.RCAg-1蛋白,并进行各项鉴定。方法对BL21(DE3)-M.RCAg-1/pDS-ex工程菌发酵产物进行纯化,对纯化的M.RCAg-1蛋白进行各种理化性质鉴定;采用Western blot法检测其反应原性;以不同剂量的M.RCAg-1蛋白免疫BALB/c小鼠及新西兰大白兔,采用间接ELISA法检测小鼠血清抗体效价;间接荧光免疫法(IFA)分析免疫血清对天然疟原虫抗原的识别;酶联免疫斑点试验检测特异性鼠T淋巴细胞的活化及细胞因子的分泌;体外生长抑制试验检测免疫兔血清对恶性疟原虫生长的影响。结果 M.RCAg-1蛋白表达量约为菌体总蛋白的30%,浓度为1.5 mg/ml,纯度可达95%左右,等电点为5.0;内毒素残留量均小于2.5 EU/mg,宿主蛋白残留量为0.08%,N-末端氨基酸序列正确;可与相应鼠单抗特异性结合;免疫小鼠血清抗体水平随着免疫次数和免疫剂量的增加而升高,20及30μg剂量组在末次免疫后,血清抗体滴度均可达1∶1 031 707;各免疫组小鼠血清均能识别恶性疟原虫天然抗原,且呈抗原剂量依赖性;10、20和30μg剂量组能刺激相应特异性脾淋巴细胞显著增殖...
【英文摘要】 Objective To purify and identify the randomly recombinant multiepitope protein M.RCAg-1 of Plasmodium falciparum vaccine.Methods The fermentation product of recombinant E.coli BL21(DE3)-M.RCAg-1 / pDS-ex was purified,then investigated for physic-chemical property and determined for reactogenicity by Western blot.BALB / c mice and New Zealand rabbits were immunized with M.RCAg-1 protein at various dosages,and determined for antibody titer in sera by indirect ELISA.The recognition of natural parasite antigen ...
【基金】 863计划“疫苗与抗体工程”重大专项(2006AA02A224); “艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治”科技重大专项(2008ZX10004-015)
【更新日期】 2011-12-27
【分类号】 R392.1
【正文快照】 疟疾是目前世界上对人类危害最严重的蚊媒寄生原虫病,但疟原虫生活周期复杂,包括蚊体内繁殖期、红细胞前期、红细胞内期,尽管目前已鉴定出约50种分别针对疟原虫不同生活时期的抗原[1],有些为候选疫苗抗原已进入不同阶段的临床试验,但今为止尚无可用的疟疾疫苗上市[2]。疟原虫抗

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