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低氧诱导人VEGF基因表达载体的构建及其蛋白表达检测
【摘要】 目的以人血管内皮细胞生长因子(hVEGF)基因的低氧反应元件(HRE)作为增强子,构建含HRE的真核表达载体,探讨含HRE不同拷贝数的载体对低氧的反应状态。方法将人工合成的HRE串联后与CMV启动子连接,替换pcDNA3.1的启动子部分,构建成低氧诱导真核表达载体;将hVEGF基因重组到此载体中,转染BHK细胞。用免疫组化染色法检测VEGF的表达,用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测低氧前后细胞hVEGF表达的变化。结果成功构建了含HRE的低氧诱导真核表达载体4HRE-pcDNA-VEGF和6HRE-pcDNA-VEGF。转染细胞后进行低氧培养,VEGF的表达均增高,含6HRE的低氧诱导作用高于4HRE。结论在含HRE的真核表达载体中,低氧时可诱导基因的表达,其拷贝数可影响诱导作用的强度。
【关键词】 缺氧诱导因子；
低氧反应元件；
真核表达载体；
血管内皮细胞生长因子；
【基金】 北京市教育委员会资助项目(KM200310025094)
- 【文献出处】 山东医药 ,Shandong Medical Journal , 编辑部邮箱 ,2011年52期
- 【分类号】R346
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