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miRNA“海绵”重组质粒的构建及对miR-483-5p的敲减

MicroRNA sponges knockdown miR-483-5p in Hepa1-6 cells

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【作者】 马宁王曦迪乔瑜李福源惠洋邹朝霞周凌云高旭

【Author】 MA Ning,WANG Xi-di,QIAO Yu,LI Fu-yuan,HUI Yang,ZOU Chao-xia,ZHOU Ling-yun,GAO Xu(Department of Biochemistry and Molecular Biology,Harbin Medical University,Harbin 150081,China)

【机构】 哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室

【摘要】 目的建立microRNA失功能(loss of function)研究模型,为功能研究提供实验材料。方法针对miR-483-5p成熟体序列设计含6个拷贝反义序列的DNA片段,称为"S-483",将其连接入含CAG启动子的pCAGGs载体中,构建pCAGGs-S-483重组质粒。利用脂质体技术瞬时转染Hep1-6细胞,经re-al-time PCR对成熟miR-483-5p含量进行检测。结果转染pCAGGs-S-483组miRNA-483含量(0.33±0.04)较转染空质粒组(1.00)明显下降(P<0.01),但对其它miRNAs无影响。结论 S-483海绵策略可有效"吸附"并降低miR-483-5p,成功构建了pCAGGs-S-483重组质粒,为其功能研究和miRNA敲减动物的建立提供了有益借鉴。

【Abstract】 Objective To study microRNA function in vitro,a genetic strategies is required to generate loss-of-function phenotype.Methods The recombinant plasmids which expressed "microRNA Sponges",a six copies antisense sequence to mature microRNA miR-483-5p,were constructed.The miR-483-5p sponges plasmids were transient transfected into mouse Hepa1-6 cells.Real-time PCR was performed to identify the amounts of mature miR-483-5p.Results The amount of mature miR-483-5p was knockdowned(0.33±0.04) by the microRNA sponges recombinant plasmids with control group as 1.00(P<0.01).Conclusion The microRNA sponges strategies to knockdown microRNA is effective in loss-of-function research.

【关键词】 miRNA海绵miR-483-5p敲减
【Key words】 microRNA spongesmiR-483-5pknockdown
【基金】 国家自然科学基金资助项目(81070457);黑龙江省自然科学基金青年基金资助项目(QC2010002)
  • 【文献出处】 哈尔滨医科大学学报 ,Journal of Harbin Medical University , 编辑部邮箱 ,2011年01期
  • 【分类号】R341
  • 【下载频次】543
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