D2蛋白酶双抗体夹心ELISA定量检测方法的建立

【摘要】 目的:建立一种定量测定D2蛋白酶的双抗体夹心ELISA方法。方法:用棋盘滴定法确定捕获抗体、检测抗体的最佳工作浓度;绘制标准曲线,确定线性范围、检测限和定量限;检测该方法的准确性(回收率)、精密性和特异性,并与Bradford法检测结果进行比较。结果:包被抗体和捕获抗体的最佳包被效价分别为1∶4 000和1∶5 000;检测的线性范围为(28~1 180)μg/L,检测限为4.6μg/L。经方法学考核,批内、批间变异系数分别为5.64%和7.17%,回收率为92.44%~105.26%,与碱性蛋白酶、蛋白酶K等其他蛋白无交叉反应,与Bradford法检测结果具有良好的相关性。结论:该方法灵敏度高,重复性好,为后期D2蛋白酶规模发酵优化、分离纯化研究提供了定量检测的方法,并为后期药代动力学、临床研究提供了思路和备选方法。更多还原